| 致谢 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 英文缩略词表 | 第14-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-26页 |
| 1.1 肿瘤异质性与肿瘤精准医疗 | 第19-20页 |
| 1.2 抗肿瘤药物的耐药性问题 | 第20-22页 |
| 1.3 基因家族功能进化中的潜在功能位点 | 第22-24页 |
| 1.4 液体活检在肿瘤精准医疗中意义重大 | 第24页 |
| 1.5 本研究主要创新点 | 第24-26页 |
| 第二章 胃癌样本中基因突变的进化特征分析 | 第26-45页 |
| 2.1 前言 | 第26-27页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第27页 |
| 2.2.2 软件和数据库 | 第27-28页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第28页 |
| 2.3 实验步骤与方法 | 第28-35页 |
| 2.3.1 多点测序------全外显子测序(WES) | 第28-32页 |
| 2.3.2 体细胞突变的分析 | 第32-33页 |
| 2.3.3 肿瘤进化分析 | 第33页 |
| 2.3.4 主干突变(trunk mutaion)的预测 | 第33-34页 |
| 2.3.5 主干突变的验证 | 第34-35页 |
| 2.4 实验结果 | 第35-44页 |
| 2.4.1 多区域全外显子测序的结果及体细胞突变的分布 | 第35-39页 |
| 2.4.2 多点测序预测主干突变 | 第39-42页 |
| 2.4.3 主干突变的突变率 | 第42-44页 |
| 2.5 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 表皮生长因子受体基因家族的进化分析与功能性位点预测 | 第45-60页 |
| 3.1 前言 | 第45-46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 数据库和软件 | 第46页 |
| 3.2.2 数据获取及序列比对 | 第46-47页 |
| 3.3 实验步骤与方法 | 第47-48页 |
| 3.3.1 进化树的构建 | 第47页 |
| 3.3.2 功能分化分析预测关键氨基酸位点 | 第47页 |
| 3.3.3 保守性分析 | 第47-48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-59页 |
| 3.4.1 ErbB基因家族的进化及功能分化 | 第48-52页 |
| 3.4.2 关键功能分化位点 | 第52-57页 |
| 3.4.3 ErbB基因家族蛋白序列保守性的分析 | 第57-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 第四章 基于游离DNA的EGFR耐药性突变的检测 | 第60-86页 |
| 4.1 前言 | 第60-61页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第61-65页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第61页 |
| 4.2.2 实验菌株和细胞 | 第61-62页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第62页 |
| 4.2.4 相关溶液的配制 | 第62-64页 |
| 4.2.5 基本操作 | 第64-65页 |
| 4.3 实验步骤与方法 | 第65-72页 |
| 4.3.1 突变型载体19T-EGFR ECD-Fc的构建 | 第65-67页 |
| 4.3.2 突变检测的引物设计及条件优化 | 第67-69页 |
| 4.3.3 游离DNA片段长度的确定 | 第69-70页 |
| 4.3.4 细胞系的选择及突变验证 | 第70-71页 |
| 4.3.5 超声破碎条件优化 | 第71页 |
| 4.3.6 片段化DNA水平上检测突变------模拟游离DNA | 第71-72页 |
| 4.4 实验结果 | 第72-85页 |
| 4.4.1 EGFR基因三个点突变的检测方法的建立 | 第72-76页 |
| 4.4.2 游离DNA的片段长度 | 第76-79页 |
| 4.4.3 细胞系验证及超声破碎DNA的条件优化 | 第79-81页 |
| 4.4.4 片段化DNA水平上的突变检测------模拟游离DNA | 第81-85页 |
| 4.5 小结 | 第85-86页 |
| 结论与展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-100页 |
| 综述 | 第100-122页 |
| 参考文献 | 第111-122页 |
| 作者简介及在读期间主要研究成果 | 第122-123页 |
| 附录 | 第123-149页 |
