| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 两种芽孢杆菌的概述 | 第13-14页 |
| 1.1.1 蜡样芽孢杆菌的概述 | 第13-14页 |
| 1.1.2 枯草芽孢杆菌的概述 | 第14页 |
| 1.2 蜡样芽孢杆菌毒素的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.2.1 致呕吐型肠毒素 | 第14-16页 |
| 1.2.2 致腹泻型肠毒素 | 第16-21页 |
| 1.3 芽孢杆菌分类鉴定 | 第21-22页 |
| 1.3.1 传统的分类学法 | 第21页 |
| 1.3.2 16SrRNA基因序列分析 | 第21-22页 |
| 1.3.3 质谱法 | 第22页 |
| 1.4 立题依据和研究意义 | 第22-24页 |
| 1.4.1 立题背景 | 第22-24页 |
| 1.4.2 研究目的意义 | 第24页 |
| 1.5 主要研究内容和技术路线 | 第24-27页 |
| 1.5.1 主要内容 | 第24-26页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 医院分离的两株细菌菌种鉴定 | 第27-33页 |
| 2.1.材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 菌株来源 | 第27页 |
| 2.1.2 试剂及设备 | 第27页 |
| 2.1.3 16SrDNA的通用引物 | 第27-28页 |
| 2.2 方法 | 第28-29页 |
| 2.2.1 形态学观察和生理生化试验 | 第28页 |
| 2.2.2 16SrRNA序列分析 | 第28-29页 |
| 2.3 结果 | 第29-32页 |
| 2.3.1 两株细菌的生理生化特征 | 第29-30页 |
| 2.3.2 两株细菌的 16SrDNA序列的扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.3 16S rRNA基因序列以及进化树分析 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 蛋白质组比较分析 | 第33-48页 |
| 3.1.材料 | 第33-37页 |
| 3.1.1 菌株来源 | 第33页 |
| 3.1.2 二维电泳相关试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 相关试剂的配制 | 第33-36页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 3.2.1 细菌蛋白提取 | 第37页 |
| 3.2.2 细菌分泌的蛋白的提取 | 第37-38页 |
| 3.2.3 蛋白浓度的测定 | 第38页 |
| 3.2.4 二维电泳 | 第38-40页 |
| 3.2.5 质谱鉴定 | 第40-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.3.1 两株芽孢杆菌的比较鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.2 蜡样芽孢杆菌蛋白和蜡样芽孢杆菌过夜培养的上清蛋白比较分析 | 第43-46页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第46-48页 |
| 第四章 蜡样芽孢杆菌毒素基因的鉴定及克隆 | 第48-55页 |
| 4.1 材料试剂 | 第48-49页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第48页 |
| 4.1.2 材料和试剂 | 第48-49页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-53页 |
| 4.2.1 蜡样芽孢杆菌基因组DNA的提取 | 第49页 |
| 4.2.2 毒素基因PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 4.2.3 PCR产物的回收与酶连 | 第50-51页 |
| 4.2.4 克隆菌大肠杆菌DH5α 感受态的制备 | 第51页 |
| 4.2.5 将过夜连接的产物转入到DH5α 感受态细胞 | 第51-52页 |
| 4.2.6 重组质粒提取、酶切验证及测序鉴定 | 第52-53页 |
| 4.3 结果和分析 | 第53-54页 |
| 4.3.1 毒素基因的PCR鉴定 | 第53页 |
| 4.3.2 非溶血性肠毒素基因的克隆及鉴定 | 第53-54页 |
| 4.4 讨论和小结 | 第54-55页 |
| 第五章 非溶血性肠毒素的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第55-71页 |
| 5.1 材料 | 第55-60页 |
| 5.1.1 菌种、载体和实验动物 | 第55页 |
| 5.1.2 试剂 | 第55-56页 |
| 5.1.3 配制的试剂 | 第56-59页 |
| 5.1.4 仪器设备 | 第59-60页 |
| 5.2 方法 | 第60-64页 |
| 5.2.1 非溶血性肠毒素原核表达载体的构建 | 第60-61页 |
| 5.2.2 含有非溶血性肠毒素基因的重组质粒的原核表达 | 第61-62页 |
| 5.2.3 蛋白质印记分析 | 第62页 |
| 5.2.4 重组蛋白的可溶性分析 | 第62页 |
| 5.2.5 蛋白点的质谱鉴定 | 第62页 |
| 5.2.6 多克隆抗血清的制备 | 第62-63页 |
| 5.2.7 His标签重组蛋白纯化 | 第63-64页 |
| 5.3 结果分析 | 第64-69页 |
| 5.3.1 非溶血性肠毒素基因的重组表达质粒的构建和鉴定 | 第64-65页 |
| 5.3.2 重组蛋白的原核表达 | 第65-67页 |
| 5.3.3 原核表达的蛋白的质谱鉴定 | 第67-68页 |
| 5.3.4 兔源多克隆抗体的验证 | 第68-69页 |
| 5.3.5 兔源多克隆抗体对蜡样芽孢杆菌分泌蛋白的检测 | 第69页 |
| 5.4 讨论小结 | 第69-71页 |
| 第六章 重组载体的构建 | 第71-81页 |
| 6.1 实验材料 | 第71页 |
| 6.1.1 菌株和载体 | 第71页 |
| 6.1.2 主要的酶和试剂 | 第71页 |
| 6.2 实验方法 | 第71-76页 |
| 6.2.1 载体pFBDM-nhe C的构建 | 第71-72页 |
| 6.2.2 构建载体pFBDM-nhe C-nhe B，pFBDM-nhe C-nhe A，pFBDM-nhe C-nhe B-nhe A | 第72-73页 |
| 6.2.3 制备DH10bacmid感受态 | 第73页 |
| 6.2.4 重组质粒的转座 | 第73页 |
| 6.2.5 重组杆粒的提取 | 第73-74页 |
| 6.2.6 草地贪夜蛾细胞（Sf-9 细胞）的悬浮培养 | 第74页 |
| 6.2.7 脂质体转染 | 第74-76页 |
| 6.3 结果与分析 | 第76-79页 |
| 6.3.1 重组转座载体的构建 | 第76页 |
| 6.3.2 重组转座载体的酶切鉴定 | 第76-78页 |
| 6.3.3 重组大质粒PCR验证 | 第78-79页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第79-81页 |
| 第七章 总结与展望 | 第81-83页 |
| 7.1 主要的工作总结 | 第81-82页 |
| 7.2 工作展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 在校期间发表论文 | 第94页 |
| 参加课题 | 第94-95页 |
| 附录 | 第95-97页 |
