| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 抗BmNPV的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 BmNPV的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.2 已经分离和鉴定得到的抗BmNPV基因 | 第13-16页 |
| 1.1.3 抗BmNPV家蚕品种的发现和鉴定 | 第16-17页 |
| 1.1.4 利用RNA干扰和CRISP/Cas9技术研究家蚕抗BmNPV | 第17页 |
| 1.2 羧酸酯酶的研究概况 | 第17-22页 |
| 1.2.1 羧酸酯酶基因的分类和命名 | 第18页 |
| 1.2.2 羧酸酯酶的分布与功能 | 第18-19页 |
| 1.2.3 羧酸酯酶结构特点和催化原理 | 第19-20页 |
| 1.2.4 昆虫羧酸酯酶与抗药性 | 第20-21页 |
| 1.2.5 羧酸酯酶与抗病毒 | 第21-22页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第22页 |
| 1.4 研究主要内容与技术路线 | 第22-25页 |
| 1.4.1 主要研究内容 | 第22-24页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 家蚕羧酸酯酶基因Bmae42的生物信息学分析 | 第25-33页 |
| 2.1 实验方法 | 第25-26页 |
| 2.1.1 序列的来源及获取 | 第25页 |
| 2.1.2 序列分析及处理方法 | 第25-26页 |
| 2.2 结果与分析 | 第26-31页 |
| 2.2.1 Bmae42染色体定位和信号肽的预测 | 第26-27页 |
| 2.2.2 Bmae42基因的序列分析及N-糖基化位点预测 | 第27-29页 |
| 2.2.3 Bmae42与其它物种同源性分析及进化树的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.4 Bmae42蛋白的三维结构 | 第31页 |
| 2.3 讨论与小结 | 第31-33页 |
| 第三章 家蚕羧酸酯酶Bmae42基因的克隆和转录时相分析 | 第33-45页 |
| 3.1 材料和试剂 | 第33-35页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.3 常用试剂配方 | 第34页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 3.2 主要方法 | 第35-40页 |
| 3.2.1 总RNA提取和cDNA合成 | 第35-36页 |
| 3.2.2 Bme42基因的引物设计和克隆 | 第36-37页 |
| 3.2.3 PCR产物回收和连接 | 第37-38页 |
| 3.2.4 转化 | 第38页 |
| 3.2.5 阳性克隆的挑选和验证 | 第38页 |
| 3.2.6 阳性克隆菌的质粒抽提和鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.7 荧光定量PCR | 第39-40页 |
| 3.3 结果和分析 | 第40-43页 |
| 3.3.1 家蚕Bmae42基因全长克隆和鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.2 家蚕Bmae42基因在不同发育时期的转录时相分析 | 第41-42页 |
| 3.3.3 家蚕Bmae42基因在不同组织中的转录时相分析 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论和小结 | 第43-45页 |
| 第四章 家蚕Bmae42基因的原核表达与多克隆抗体制备 | 第45-62页 |
| 4.1 试剂和材料 | 第45-49页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第45页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第45-46页 |
| 4.1.3 常用试剂配方 | 第46-48页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第48-49页 |
| 4.2 主要方法 | 第49-53页 |
| 4.2.1 家蚕Bmae42基因重组表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 4.2.2 家蚕基因Bmae42的原核表达及鉴定 | 第50页 |
| 4.2.3 Western Blot | 第50-51页 |
| 4.2.4 融合蛋白存在形式检测方法 | 第51页 |
| 4.2.5 包涵体复性方法 | 第51-52页 |
| 4.2.6 包涵体蛋白纯化方法 | 第52页 |
| 4.2.7 Bmae42蛋白纯化方法 | 第52页 |
| 4.2.8 多克隆抗体血清的制备与纯化 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-61页 |
| 4.3.1 Bmae42基因的原核表达载体鉴定 | 第53-54页 |
| 4.3.2 重组蛋白 306-Bmae42的原核表达 | 第54-55页 |
| 4.3.3 重组蛋白的纯化 | 第55-57页 |
| 4.3.4 Bmae42-pET28a-sumo重组质粒鉴定 | 第57-58页 |
| 4.3.5 目的蛋白纯化 | 第58-59页 |
| 4.3.6 不同品种家蚕羧酸酯酶Bmae42的活性分析 | 第59-60页 |
| 4.3.7 多克隆抗体制备和验证 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论和小结 | 第61-62页 |
| 第五章 BmNPV感染家蚕对Bmae42基因转录水平的影响 | 第62-74页 |
| 5.1 主要材料 | 第62-63页 |
| 5.2 主要方法 | 第63-65页 |
| 5.2.1 BmNPV多角体病毒的繁殖与纯化 | 第63页 |
| 5.2.2 家蚕接种病毒及取材 | 第63页 |
| 5.2.3 内参基因筛选及引物设计 | 第63-64页 |
| 5.2.4 RNA提取、cDNA合成、荧光定量PCR及标准曲线绘制 | 第64页 |
| 5.2.5 内参基因稳定性分析方法 | 第64页 |
| 5.2.6 抗病基因荧光定量PCR引物设计 | 第64-65页 |
| 5.3 结果与分析 | 第65-71页 |
| 5.3.1 NormFinder分析结果 | 第66页 |
| 5.3.2 geNorm分析结果 | 第66-67页 |
| 5.3.3 BestKeeper结果 | 第67-68页 |
| 5.3.4 α-tubulin的蛋白表达水平 | 第68-69页 |
| 5.3.5 BmNPV感染家蚕对其它免疫通路基因的影响 | 第69-71页 |
| 5.3.6 BmNPV感染家蚕对羧酸酯酶Bmae42基因转录水平的影响 | 第71页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第71-74页 |
| 第六章 Bmae42的抗BmNPV侵染分析 | 第74-81页 |
| 6.1 试剂和材料 | 第74-75页 |
| 6.1.1 主要材料 | 第74页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第74页 |
| 6.1.3 常用试剂配方 | 第74-75页 |
| 6.2 主要方法 | 第75-77页 |
| 6.2.1 细胞培养和病毒感染 | 第75页 |
| 6.2.2 质粒构建 | 第75页 |
| 6.2.3 Guide-RNA设计 | 第75页 |
| 6.2.4 体外检测靶点效率 | 第75-77页 |
| 6.3 结果与分析 | 第77-80页 |
| 6.3.1 瞬时表达 Bmae42 对 BmNPV 增殖的影响 | 第77-78页 |
| 6.3.2 gRNA靶点设计 | 第78页 |
| 6.3.3 体外gRNA靶点效率检测 | 第78-79页 |
| 6.3.4 敲除Bmae42对BmNPV增殖的影响 | 第79-80页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第80-81页 |
| 第七章 总结与展望 | 第81-83页 |
| 7.1 主要工作总结 | 第81-82页 |
| 7.2 工作展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 在校期间发表论文 | 第93页 |
| 参与科研项目 | 第93页 |
