| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 生物乙醇 | 第10-12页 |
| 1.1.1 生物乙醇是生物质能源的一种 | 第10页 |
| 1.1.2 生物乙醇对化石能源的替代作用 | 第10-11页 |
| 1.1.3 生物乙醇的发展现状 | 第11页 |
| 1.1.4 量产生物乙醇面临的问题 | 第11-12页 |
| 1.2 以甘油为底物生产乙醇 | 第12-14页 |
| 1.2.1 甘油是生物柴油生产中的副产物 | 第12页 |
| 1.2.2 利用甘油生产乙醇的必要性 | 第12页 |
| 1.2.3 利用甘油生产乙醇的可行性 | 第12-14页 |
| 1.3 noxE基因编码的过氧化物酶对NADH的氧化 | 第14-15页 |
| 1.3.1 酿酒酵母细胞中甘油的重要作用 | 第14-15页 |
| 1.3.2 noxE基因对NADH的氧化作用 | 第15页 |
| 1.4 甘油吸收利用过程中的关键基因DAK1 DAK2 GCY1 | 第15-18页 |
| 1.4.1 甘油副产物的产生 | 第16页 |
| 1.4.2 甘油和乙醇代谢通路的转换 | 第16页 |
| 1.4.3 编码甘油脱氢酶的基因GCY1 | 第16-17页 |
| 1.4.4 DAK1、DAK2 基因对于利用甘油生产乙醇的作用 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题的研究背景、内容和目的 | 第18-19页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第19-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-26页 |
| 2.1.1 菌株、质粒与引物 | 第19-21页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第26页 |
| 2.2.2 小规模提取大肠杆菌质粒法（CTAB法） | 第26-27页 |
| 2.2.3 酵母染色体的快速分离 | 第27页 |
| 2.2.4 PCR扩增反应 | 第27-28页 |
| 2.2.5 DNA的限制酶消化 | 第28-29页 |
| 2.2.6 DNA的连接反应 | 第29页 |
| 2.2.7 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.2.8 酵母细胞的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.9 两步基因置换法修饰目的基因 | 第30-31页 |
| 2.2.10 生长曲线的测量 | 第31-33页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第33-55页 |
| 3.1 noxE基因对LGE4 菌株生长的影响 | 第33-37页 |
| 3.1.1 YCplac33-PGK1t-noxE质粒的构建 | 第33-35页 |
| 3.1.2 YCplac33-GPD1p-noxE-PGK1t质粒的构建 | 第35页 |
| 3.1.3 表达noxE对出发菌株LGE4 生长的影响 | 第35-37页 |
| 3.1.3.1 CM-URA3 平板上的生长状况比较 | 第35-36页 |
| 3.1.3.2 CM-URA3 液体培养基中的生长状况比较 | 第36-37页 |
| 3.2 在菌株LGE4 中整合noxE基因 | 第37-43页 |
| 3.2.1 YIplac211-GPD1pt-noxE质粒的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.2 菌株LGE4 中noxE基因的整合 | 第39-41页 |
| 3.2.3 整合noxE基因的LGE4-N菌株生长状况 | 第41-43页 |
| 3.2.3.1 菌株LGE4 和LGE4-N在YPD平板上的生长状况比较 | 第41-42页 |
| 3.2.3.2 菌株LGE4 和LGE4-N在在YPD液体培养基中的生长状况比较 | 第42-43页 |
| 3.3 过量表达DAK1 DAK2 GCY1 质粒的构建 | 第43-49页 |
| 3.3.1 YCplac33-PGK1p质粒的构建 | 第43-44页 |
| 3.3.2 YEplac195-PGK1p质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.3.3 YCplac33-PGK1p-DAK1 质粒的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.4 YCplac33-PGK1p-DAK2 质粒的构建 | 第46页 |
| 3.3.5 YCplac33-PGK1p-GCY1 质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.3.6 YEplac195-PGK1p-DAK1 质粒的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.7 YEplac195-PGK1p-DAK2 质粒的构建 | 第48页 |
| 3.3.8 YEplac195-PGK1p-GCY1 质粒的构建 | 第48-49页 |
| 3.4 在LGE4-N菌株中过表达DAK1、DAK2、GCY1 基因 | 第49-55页 |
| 3.4.1 在CM- URA3 平板培养基上考察各质粒对菌体生长的影响 | 第49-51页 |
| 3.4.2 在CM-URA3+gly平板培养基上考察各质粒对菌体生长的作用 | 第51-52页 |
| 3.4.3 在CM-URA3+gly液体培养基中考察各质粒对菌体生长的影响 | 第52-55页 |
| 第四章 总结与展望 | 第55-57页 |
| 4.1 工作总结 | 第55页 |
| 4.2 工作展望 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录1 生化名词缩写 | 第62-63页 |
| 附录2 基因及其相应编码产物 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
