中文摘要 | 第3-4页 |
英文摘要 | 第4页 |
第一章 文献综述 | 第7-21页 |
§1.1 猪瘟病毒分子生物学研究进展 | 第7-16页 |
§1.1.1 CSFV的基因组结构和全序列研究概述 | 第8-10页 |
§1.1.2 CSFV基因组编码的蛋白质及其功能 | 第10-13页 |
§1.1.3 CSFV基因组内部的缺失、重组与感染CSFV的细胞出现CPE有关 | 第13-14页 |
§1.1.4 NS3基因在病毒的复制及病毒与宿主细胞关系中的作用 | 第14-16页 |
§1.2 猪瘟病毒分子免疫学研究进展 | 第16-21页 |
§1.2.1 囊膜结构糖蛋白E2和E0是CSFV的主要保护性抗原 | 第17-18页 |
§1.2.2 猪瘟的防制策略与防制新技术的研究 | 第18-21页 |
第二章 猪瘟C-株和野毒株p80基因序列分析 | 第21-35页 |
§2.1 材料 | 第21-22页 |
§2.1.1 菌株与质粒 | 第21页 |
§2.1.2 工具酶与试剂 | 第21页 |
§2.1.3 仪器与设备 | 第21-22页 |
§2.1.4 DNA操作中具它有关主要试剂 | 第22页 |
§2.2 方法与步骤 | 第22-26页 |
§2.2.1 目的片段的扩增与回收 | 第22-24页 |
§2.2.2 目的基因的克隆 | 第24-25页 |
§2.2.3 重组质粒的提取与鉴定 | 第25-26页 |
§2.3 结果 | 第26-33页 |
§2.3.1 RT-PCR产物的电泳结果 | 第26页 |
§2.3.2 目的片段的克隆与鉴定 | 第26页 |
§2.3.3 CSFV p80基因的核苷酸和相应的氨基酸序列 | 第26-32页 |
§2.3.4 核苷酸和氨基酸序列同源性比较 | 第32-33页 |
§2.4 讨论 | 第33-35页 |
§2.4.1 p80基因的高度保守性 | 第33页 |
§2.4.2 RNase的存在与否及引物的设计是的RT-PCR成功的关键 | 第33页 |
§2.4.3 nPCR可增强反应的特异性和敏感性 | 第33页 |
§2.4.4 先进的科学技术对实验的成功起着重要作用 | 第33-35页 |
第三章 猪瘟病毒p80基因NTPase/RNA helicase功能区原核表达载体的构建和表达 | 第35-45页 |
§3.1 材料 | 第35-36页 |
§3.1.1 质粒与细菌 | 第35页 |
§3.1.2 工具酶及试剂 | 第35-36页 |
§3.1.3 仪器与设备 | 第36页 |
§3.1.4 DNA操作中其它有关主要试剂 | 第36页 |
§3.2 方法与步骤 | 第36-38页 |
§3.2.1 pGEM-GXNS3和pGEM-CNS3、pET-30a(+)的转化、扩增及质粒的提取 | 第36页 |
§3.2.2 引物设计、合成及目的片段的获得 | 第36页 |
§3.2.3 重组表达载体的构建与鉴定 | 第36页 |
§3.2.4 p80基因NTPase/RNA helicase功能区在大肠杆菌中的表达 | 第36页 |
§3.2.5 表达蛋白的检测 | 第36-38页 |
§3.3 结果 | 第38-42页 |
§3.3.1 sGXNS3和sCNS3的体外扩增及重组表达载体的构建 | 第38-41页 |
§3.3.2 表达蛋白的SDS-PAGE结果 | 第41页 |
§3.3.3 表达蛋白的Western blot结果 | 第41-42页 |
§3.4 讨论 | 第42-45页 |
§3.4.1 选择合适的宿主菌和表达载体是实验成功的关键 | 第42-43页 |
§3.4.2 诱导剂的浓度和诱导时间影响目的蛋白的表达 | 第43页 |
§3.4.3 外源基因的长度是影响目的蛋白表达的因素之一 | 第43-44页 |
§3.4.4 p80蛋白可为鉴别疫苗免疫猪和野毒感染猪提供依据 | 第44-45页 |
参考文献 | 第45-51页 |
致谢 | 第51-52页 |
作者简介 | 第52页 |