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猪瘟病毒p80基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

中文摘要第3-4页
英文摘要第4页
第一章 文献综述第7-21页
    §1.1 猪瘟病毒分子生物学研究进展第7-16页
        §1.1.1 CSFV的基因组结构和全序列研究概述第8-10页
        §1.1.2 CSFV基因组编码的蛋白质及其功能第10-13页
        §1.1.3 CSFV基因组内部的缺失、重组与感染CSFV的细胞出现CPE有关第13-14页
        §1.1.4 NS3基因在病毒的复制及病毒与宿主细胞关系中的作用第14-16页
    §1.2 猪瘟病毒分子免疫学研究进展第16-21页
        §1.2.1 囊膜结构糖蛋白E2和E0是CSFV的主要保护性抗原第17-18页
        §1.2.2 猪瘟的防制策略与防制新技术的研究第18-21页
第二章 猪瘟C-株和野毒株p80基因序列分析第21-35页
    §2.1 材料第21-22页
        §2.1.1 菌株与质粒第21页
        §2.1.2 工具酶与试剂第21页
        §2.1.3 仪器与设备第21-22页
        §2.1.4 DNA操作中具它有关主要试剂第22页
    §2.2 方法与步骤第22-26页
        §2.2.1 目的片段的扩增与回收第22-24页
        §2.2.2 目的基因的克隆第24-25页
        §2.2.3 重组质粒的提取与鉴定第25-26页
    §2.3 结果第26-33页
        §2.3.1 RT-PCR产物的电泳结果第26页
        §2.3.2 目的片段的克隆与鉴定第26页
        §2.3.3 CSFV p80基因的核苷酸和相应的氨基酸序列第26-32页
        §2.3.4 核苷酸和氨基酸序列同源性比较第32-33页
    §2.4 讨论第33-35页
        §2.4.1 p80基因的高度保守性第33页
        §2.4.2 RNase的存在与否及引物的设计是的RT-PCR成功的关键第33页
        §2.4.3 nPCR可增强反应的特异性和敏感性第33页
        §2.4.4 先进的科学技术对实验的成功起着重要作用第33-35页
第三章 猪瘟病毒p80基因NTPase/RNA helicase功能区原核表达载体的构建和表达第35-45页
    §3.1 材料第35-36页
        §3.1.1 质粒与细菌第35页
        §3.1.2 工具酶及试剂第35-36页
        §3.1.3 仪器与设备第36页
        §3.1.4 DNA操作中其它有关主要试剂第36页
    §3.2 方法与步骤第36-38页
        §3.2.1 pGEM-GXNS3和pGEM-CNS3、pET-30a(+)的转化、扩增及质粒的提取第36页
        §3.2.2 引物设计、合成及目的片段的获得第36页
        §3.2.3 重组表达载体的构建与鉴定第36页
        §3.2.4 p80基因NTPase/RNA helicase功能区在大肠杆菌中的表达第36页
        §3.2.5 表达蛋白的检测第36-38页
    §3.3 结果第38-42页
        §3.3.1 sGXNS3和sCNS3的体外扩增及重组表达载体的构建第38-41页
        §3.3.2 表达蛋白的SDS-PAGE结果第41页
        §3.3.3 表达蛋白的Western blot结果第41-42页
    §3.4 讨论第42-45页
        §3.4.1 选择合适的宿主菌和表达载体是实验成功的关键第42-43页
        §3.4.2 诱导剂的浓度和诱导时间影响目的蛋白的表达第43页
        §3.4.3 外源基因的长度是影响目的蛋白表达的因素之一第43-44页
        §3.4.4 p80蛋白可为鉴别疫苗免疫猪和野毒感染猪提供依据第44-45页
参考文献第45-51页
致谢第51-52页
作者简介第52页

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