| 论文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 研究背景及文献综述 | 第14-23页 |
| 化学诱变技术 | 第14页 |
| 基因捕获技术 | 第14-15页 |
| 传统基因打靶技术 | 第15-18页 |
| 锌指核酸酶技术 | 第18-23页 |
| 第二章 基于TALEN的基因敲除小鼠模型的构建 | 第23-49页 |
| 第一节 前言 | 第23-28页 |
| 第二节 材料与方法 | 第28-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-38页 |
| 第三节 实验结果与讨论 | 第38-49页 |
| 3.1 TALEN靶点的设计 | 第38-39页 |
| 3.2 TALEN能够有效敲除小鼠目的基因 | 第39-41页 |
| 3.3 TALEN所诱导产生突变的序列分析 | 第41-44页 |
| 3.4 对于TALEN引起的Lepr体细胞突变的表型鉴定 | 第44-46页 |
| 3.5 TALEN引起的突变的高效生殖系细胞遗传 | 第46-47页 |
| 3.6 小结 | 第47-49页 |
| 第三章 基于CRISPR/Cas的基因敲除大鼠与小鼠模型的构建 | 第49-70页 |
| 第一节 前言 | 第49-52页 |
| 第二节 材料与方法 | 第52-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第52-55页 |
| 2.2 实验方法 | 第55-57页 |
| 第三节 实验结果与讨论 | 第57-70页 |
| 3.1 质粒形式的Cas9-crRNA：tracrRNA载体的敲除效率较低 | 第57-58页 |
| 3.2 RNA形式的Cas9/gRNA能实现高效敲除 | 第58-60页 |
| 3.3 通过临近双靶点的切割实现对长片段DNA的删除 | 第60-62页 |
| 3.4 CRISPR/Cas对大鼠基因的高效敲除 | 第62-64页 |
| 3.5 Mc4r基因突变首建大鼠出现肥胖等表型 | 第64-66页 |
| 3.6 CRISPR/Cas系统引起的基因突变能够有效遗传 | 第66-67页 |
| 3.7 CRISPR/Cas系统在小鼠中具有良好的靶向特异性 | 第67-68页 |
| 3.8 小结 | 第68-70页 |
| 第四章 总结与展望 | 第70-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 附录Ⅰ 用于Cas9 mRNA体外转录的载体全序列 | 第82-88页 |
| 附录Ⅱ 用于测序和T7E1检测的寡核苷酸序列 | 第88-90页 |
| 附录Ⅲ 用于扩增潜在off-target位点的寡核苷酸序列 | 第90-93页 |
| 附录Ⅳ 略缩词表 | 第93-94页 |
| 附录Ⅴ 攻读博士学位期间取得的成果 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
