| 目录 | 第6-9页 |
| 致谢 | 第9-12页 |
| 序言 | 第12-13页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| ABSTRACT | 第15-16页 |
| 1 绪论 | 第17-33页 |
| 1.1 水稻细菌性褐条病及其致病细菌 | 第17-19页 |
| 1.1.1 水稻细菌性褐条病的发生与危害及其病原物 | 第17-18页 |
| 1.1.2 水稻细菌性褐条病的防治 | 第18-19页 |
| 1.2 细菌Ⅳ型菌毛 | 第19-23页 |
| 1.2.1 细菌菌毛的生理功能和分类 | 第19-20页 |
| 1.2.2 细菌Ⅳ型菌毛的相关基因及研究进展 | 第20-22页 |
| 1.2.3 细菌Ⅳ型菌毛与细菌的游动性、生物膜形成以及致病性的关系 | 第22-23页 |
| 1.3 细菌的Ⅵ型分泌系统 | 第23-27页 |
| 1.3.1 细菌的分泌系统和Ⅵ型分泌系统的发现 | 第23-24页 |
| 1.3.2 T6SS的结构组成 | 第24-27页 |
| 1.4 细菌基因组进化过程中的基因水平转移 | 第27-29页 |
| 1.4.1 基因组进化过程中的基因水平转移机制 | 第27页 |
| 1.4.2 细菌基因水平转移的方式 | 第27-28页 |
| 1.4.3 细菌基因水平转移的检测方法 | 第28-29页 |
| 1.5 TetR调控蛋白与氧胁迫环境 | 第29-31页 |
| 1.5.1 氧胁迫环境(Oxidative Stress) | 第29-30页 |
| 1.5.2 TetR蛋白质家族 | 第30-31页 |
| 1.6 本研究的内容和意义 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-58页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第33-35页 |
| 2.1.1 实验菌株、质粒载体和试剂 | 第33页 |
| 2.1.2 实验试剂和培养基 | 第33-35页 |
| 2.2 常规实验操作 | 第35-41页 |
| 2.2.1 常规 PCR | 第35-36页 |
| 2.2.2 酶切和连接反应体系 | 第36页 |
| 2.2.3 热激、电击和滤膜杂交转化实验 | 第36-38页 |
| 2.2.4 质粒提取、细菌基因组DNA提取 | 第38-40页 |
| 2.2.5 地高辛标记探针的Southern杂交(Southern Blot) | 第40-41页 |
| 2.3 A. oryzae突变体的构建和回补 | 第41-44页 |
| 2.3.1 单交换同源重组构建pilP、icmF、dotU基因的插入突变 | 第41-42页 |
| 2.3.2 双交换同源重组构建tetR基因的缺失突变 | 第42-44页 |
| 2.4 接种实验和细菌致病性测定 | 第44页 |
| 2.5 水稻细菌性褐条病菌A. oryzae中pilP基因的生物学性状测定 | 第44-45页 |
| 2.5.1 生物膜测定 | 第44-45页 |
| 2.5.2 细菌游动性测定 | 第45页 |
| 2.5.3 菌落形态的透射电镜观察(Transmission electron microscopy,TEM) | 第45页 |
| 2.6 水稻细菌性褐条病菌A. oryzae中icmF和dotU基因的相互作用研究 | 第45-48页 |
| 2.6.1 双分子荧光互补(Biomolecular Fluorescence Complementation,BiFC) | 第45-47页 |
| 2.6.2 细菌双杂交(Bacterial two-hybrid,BACTH) | 第47-48页 |
| 2.7 水稻细菌性褐条病菌A. oryzae RS-1中tetR基因和所在基因簇的功能分析 | 第48-58页 |
| 2.7.1 比较基因组和构建系统发育树 | 第48页 |
| 2.7.2 细胞在不同浓度氧胁迫环境下的存活率测定 | 第48-49页 |
| 2.7.3 细胞质蛋白的提取、1D蛋白质电泳和质谱 | 第49-52页 |
| 2.7.4 SOD和CAT酶活性测定 | 第52页 |
| 2.7.5 Real-Time PCR检测 | 第52-54页 |
| 2.7.6 TetR蛋白的表达纯化 | 第54-55页 |
| 2.7.7 凝胶阻滞实验(Electrophoretic Mobility Shift Assays,EMSA) | 第55-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-87页 |
| 3.1 水稻细菌性褐条病菌A. oryzae中pilP基因的功能鉴定 | 第58-65页 |
| 3.1.1 敲除pilP基因后,A. oryzae致病性显著下降 | 第59-61页 |
| 3.1.2 pilP基因缺失后,细菌丧失菌圈和Ⅳ型菌毛 | 第61-63页 |
| 3.1.3 pilP基因能够影响A. oryzae的游动性及生物膜形成 | 第63-65页 |
| 3.1.4 pilP基因在A. oryzae上的功能小结 | 第65页 |
| 3.2 水稻细菌性褐条病菌A. oryzae中icmF和dotU基因的相互作用 | 第65-70页 |
| 3.2.1 T6SS能够影响A. oryzae细菌致病性 | 第65-68页 |
| 3.2.2 icmF和dotU基因的互作 | 第68-70页 |
| 3.3 水稻细菌性褐条病菌A. oryzae中氧胁迫相关基因簇的发现以及tetR转录调控基因的功能分析 | 第70-87页 |
| 3.3.1 tetR转录调控基因及其所在的基因簇的发现 | 第70-74页 |
| 3.3.2 tetR基因突变体对活性氧胁迫的耐受力增强 | 第74-78页 |
| 3.3.3 tetR基因突变后,A. oryzae菌中SOD和CAT酶的活性升高 | 第78-79页 |
| 3.3.4 通过LC-MS/MS质谱鉴定受TetR蛋白调控的其他细胞质蛋白 | 第79-82页 |
| 3.3.5 荧光定量PCR分析TetR调控蛋白对其他基因表达的影响 | 第82-83页 |
| 3.3.6 TetR蛋白能够直接结合在pqiA'和tetR之间的启动子区域 | 第83-85页 |
| 3.3.7 TetR蛋白的功能总结 | 第85-87页 |
| 4 讨论 | 第87-91页 |
| 5 全文总结 | 第91-93页 |
| 5.1 A. oryzae RS-1的致病机制研究 | 第91页 |
| 5.2 A. oryzae RS-1中活性氧胁迫相关基因簇和调控蛋白TetR | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-106页 |
| 附录 | 第106-123页 |
| 附录1 本研究用到的菌株和质粒 | 第106-109页 |
| 附录2 本研究用到的PCR引物列表 | 第109-111页 |
| 附录3 蛋白质质谱鉴定出的RS-1和RS-tetR之间的差异蛋白 | 第111-117页 |
| 附录4 本研究所用到的载体图谱 | 第117-123页 |
| 作者简介 | 第123页 |
| 主要发表论文 | 第123页 |
