| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 文献综述 | 第9-14页 |
| 英文缩写词表 | 第14-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 1.材料和方法 | 第16-30页 |
| 1.1 试验材料 | 第16-20页 |
| 1.1.1 病毒和细胞 | 第16页 |
| 1.1.2 载体、受体菌与抗体 | 第16页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 1.1.4 主要试剂 | 第17页 |
| 1.1.5 主要溶液的配制 | 第17-20页 |
| 1.1.6 实验动物 | 第20页 |
| 1.2 试验方法 | 第20-30页 |
| 1.2.1 引物设计与合成 | 第20页 |
| 1.2.2 病毒总RNA的提取 | 第20-21页 |
| 1.2.3 目的基困的扩增与纯化回收 | 第21页 |
| 1.2.4 重组质粒构建 | 第21-24页 |
| 1.2.4.1 PCR产物与载体的双酶切 | 第21-22页 |
| 1.2.4.2 连接与转化 | 第22-24页 |
| 1.2.5 重组蛋白的表达和SDS-PAGE分析 | 第24-26页 |
| 1.2.6 重组蛋白的Western blot鉴定与粗纯化 | 第26-27页 |
| 1.2.7 多克隆抗体的制备 | 第27页 |
| 1.2.8 Western blot分析 | 第27页 |
| 1.2.9 多克隆抗体的间接免疫焚光实验 | 第27页 |
| 1.2.10 实时荧光定量PCR标准品的制备 | 第27-28页 |
| 1.2.11 实时荧光定量PCR反应条件的优化 | 第28页 |
| 1.2.12 绝对定量标准曲线的建立 | 第28页 |
| 1.2.13 实时荧光定量PCR检测方法特异性试验 | 第28页 |
| 1.2.14 实时荧光定连PCR检测方法敏感性试验 | 第28页 |
| 1.2.15 实时荧光定连PCR检测方法重复性试验 | 第28-29页 |
| 1.2.16 人工感染样品检测 | 第29-30页 |
| 2.结果与分析 | 第30-38页 |
| 2.1 坦布苏病毒E蛋白原核表达与纯化 | 第30-33页 |
| 2.1.1 E基因的PCR扩增 | 第30页 |
| 2.1.2 重组表达载体p ET-32a-E的构建 | 第30-31页 |
| 2.1.3 重组蛋白的表达及SDS-PAGE分析 | 第31-32页 |
| 2.1.4 重组蛋白的粗纯化 | 第32页 |
| 2.1.5 Western blot分析 | 第32-33页 |
| 2.1.6 间接免疫荧光实验（IFA）检测E蛋白的表达 | 第33页 |
| 2.2 荧光定量PCR检测方法的建立 | 第33-38页 |
| 2.2.1 鸭坦布苏病毒E基因的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.2 重组质粒的筛选和鉴定 | 第34页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR反应条件的优化 | 第34页 |
| 2.2.4 绝对定量标准曲线的建立 | 第34-35页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR检测方法特异性试验 | 第35-36页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR检测方法敏感性试验 | 第36页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR检测方法重复性试验 | 第36-37页 |
| 2.2.8 人工感染样品检测 | 第37-38页 |
| 3.讨论 | 第38-40页 |
| 4.结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49-50页 |
| 硕士期间发表文章 | 第50页 |
