| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 miRNA的研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1.1 miRNA的发现 | 第12-13页 |
| 1.1.2 miRNA的形成与作用机制 | 第13-15页 |
| 1.1.3 现代生物学技术在miRNA研究中的应用 | 第15-16页 |
| 1.1.4 miRNA靶基因预测与验证方法的研究 | 第16-19页 |
| 1.1.5 miR-23a和miR-27b的研究现状 | 第19页 |
| 1.2 肌纤维类型与肉质的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.2.1 肌纤维的结构 | 第19-20页 |
| 1.2.2 肌纤维类型的分类方法 | 第20-21页 |
| 1.2.3 肌纤维类型的特征 | 第21-22页 |
| 1.2.4 肌纤维类型对肉质的影响 | 第22-23页 |
| 1.3 线粒体拷贝数的研究 | 第23-26页 |
| 1.3.1 线粒体的生物学功能 | 第23-24页 |
| 1.3.2 线粒体的生物合成 | 第24-25页 |
| 1.3.3 线粒体生成的转录调控 | 第25-26页 |
| 1.4 本实验的研究内容和意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-44页 |
| 2.1 试验材料 | 第27-31页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第28页 |
| 2.1.3 肌肉miRNA高通量测序数据 | 第28页 |
| 2.1.4 组织、细胞总DNA | 第28页 |
| 2.1.5 组织、细胞总RNA | 第28页 |
| 2.1.6 引物合成 | 第28-30页 |
| 2.1.7 质粒、菌株和细胞系 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-44页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第31页 |
| 2.2.2 组织和细胞总DNA提取 | 第31-32页 |
| 2.2.3 组织和细胞总RNA提取 | 第32页 |
| 2.2.4 mRNA反转录 | 第32-33页 |
| 2.2.5 miRNA反转录 | 第33页 |
| 2.2.6 PCR的扩增与条带检测 | 第33-34页 |
| 2.2.7 Real-time PCR | 第34页 |
| 2.2.8 Foxj3和Mef2c基因部分3'-UTR的扩增及克隆测序 | 第34-38页 |
| 2.2.9 Foxj3和Mef2c基因部分3'-UTR的真核表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.2.10 C2C12细胞的培养 | 第40-42页 |
| 2.2.11 Hela细胞的培养 | 第42-43页 |
| 2.2.12 荧光素酶活性检测 | 第43页 |
| 2.2.13 细胞线粒体染色 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-61页 |
| 3.1 调控线粒体拷贝数MIRNA的筛选 | 第44页 |
| 3.2 miR-23a和miR-27b与靶基因结合位点的进化保守性分析 | 第44-46页 |
| 3.2.1 miR-23a和miR-27b与靶基因结合位点和二级结构分析 | 第44-45页 |
| 3.2.2 Mef2c与Foxj3基因的保守性和miR-23a与miR-27b的种子序列的保守性 | 第45-46页 |
| 3.3 Mef2c和Foxj3的3'-UTR片段双荧光素酶报告基因载体构建 | 第46-50页 |
| 3.3.1 Mef2c和Foxj3基因3'-UTR区扩增 | 第46-47页 |
| 3.3.2 重组质粒Mef2c 3'-UTR psiCHECK~(TM)-2和Foxj3 3'-UTR psiCHECK~(TM)-2构建与鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.3 重组质粒Mef2c 3'-UTR psiCHECK~(TM)-2和Foxj3 3'-UTR psiCHECK~(TM)-2的序列分析 | 第48-50页 |
| 3.4 miR-23a与Mef2c和miR-27b与Foxj3间靶基因关系的验证 | 第50页 |
| 3.5 miR-23a与miR-27b对C2C12细胞肌纤维类型的影响 | 第50-61页 |
| 3.5.1 C_2C_(12)转染效率的优化 | 第50-52页 |
| 3.5.2 C_2C_(12)增值和分化过程中miR-23a和miR-27b以及线粒体拷贝数的变化 | 第52-54页 |
| 3.5.3 过表达或抑制miR-23a和miR-27b对线粒体拷贝数的影响 | 第54-60页 |
| 3.5.6 miR-23a和miR-27b与线粒体和肌纤维类型的相关性在猪多个肌肉组织中的验证 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-68页 |
| 4.1 miR-23a与miR-27b的筛选 | 第61-63页 |
| 4.2 C_2C_(12)细胞转染效率的优化 | 第63-65页 |
| 4.3 miR-23a与miR-27b对线粒体拷贝数和肌纤维类型的影响 | 第65-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位之间发表的学术论文 | 第79页 |
