| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 缩略词 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-17页 |
| 1. 灵菌红素的研究概况 | 第11-15页 |
| 1.1 灵菌红素的简介 | 第11-12页 |
| 1.2 灵菌红素的生物功能 | 第12-13页 |
| 1.3 灵菌红素的生物合成途径 | 第13-15页 |
| 1.4 灵菌红素生物合成途径相关酶结构生物学研究 | 第15页 |
| 1.4.1 灵菌红素生物合成途径相关酶结构生物学研究现状 | 第15页 |
| 1.4.2 结构生物学研究方法介绍 | 第15页 |
| 2. 沙雷氏菌Serratia sp. FS14简介 | 第15-16页 |
| 3. 转氨酶家族的简介 | 第16-17页 |
| 第一章 灵菌红素生物合成途径中pigE基因的克隆表达、PigE蛋白的纯化及其催化结构域的结构解析 | 第17-43页 |
| 1.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 1.1.1 质粒及菌株 | 第17页 |
| 1.1.2 培养基 | 第17页 |
| 1.1.3 酶和试剂 | 第17页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第17-18页 |
| 1.2 实验方法 | 第18-22页 |
| 1.2.1 Serratia sp. FS14中pigE基因重组质粒的构建及蛋白的纯化 | 第18-21页 |
| 1.2.1.1 引物设计与PCR扩增 | 第18-19页 |
| 1.2.1.2 pigE基因PCR产物的纯化 | 第19页 |
| 1.2.1.3 pET24b-PigE表达载体的构建 | 第19页 |
| 1.2.1.4 pET24b-PigE重组质粒的筛选与鉴定 | 第19页 |
| 1.2.1.5 pigE基因编码蛋白质的结构特征分析 | 第19页 |
| 1.2.1.6 重组PigE蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第19-20页 |
| 1.2.1.7 重组PigE蛋白表达条件的优化 | 第20页 |
| 1.2.1.8 重组PigE蛋白的小量纯化与包涵体检测 | 第20页 |
| 1.2.1.9 重组PigE蛋白的大量纯化 | 第20-21页 |
| 1.2.2 Serratia sp. FS14中PigE蛋白结晶条件的初筛及优化 | 第21-22页 |
| 1.2.2.1 PigE蛋白结晶条件的初筛 | 第21页 |
| 1.2.2.2 PigE蛋白晶体的检测 | 第21页 |
| 1.2.2.3 PigE蛋白结晶条件的优化 | 第21页 |
| 1.2.2.4 PigE蛋白晶体的冻存 | 第21-22页 |
| 1.2.3 Serratia sp. FS14中PigE蛋白晶体衍射数据的采集与处理 | 第22页 |
| 1.2.4 Serratia sp. FS14中PigE蛋白的结构解析 | 第22页 |
| 1.3 结果与分析 | 第22-40页 |
| 1.3.1 Serratia sp. FS14中pigE基因重组质粒的构建及表达蛋白纯化 | 第22-29页 |
| 1.3.1.1 pigE基因的克隆与鉴定 | 第22-23页 |
| 1.3.1.2 Serratia sp. FS14中pigE基因所编码蛋白的序特征分析 | 第23页 |
| 1.3.1.3 重组pET24b-PigE在大肠杆菌中的诱导表达,小量纯化及包涵体检测 | 第23-25页 |
| 1.3.1.4 重组PigE蛋白表达条件的优化 | 第25-27页 |
| 1.3.1.5 重组PigE蛋白的大量纯化 | 第27-29页 |
| 1.3.2 Serratia sp. FS14中PigE蛋白结晶条件的筛选与优化 | 第29-32页 |
| 1.3.2.1 PigE蛋白结晶条件的初筛 | 第29-30页 |
| 1.3.2.2 PigE蛋白晶体的鉴定 | 第30页 |
| 1.3.2.3 PigE蛋白结晶条件的优化、蛋白晶体衍射及数据处理 | 第30-32页 |
| 1.3.3 Serratia sp. FS14中PigE蛋白的结构解析 | 第32-40页 |
| 1.3.3.1 PigE蛋白结构的整体分析 | 第32-36页 |
| 1.3.3.2 PigE蛋白结构中PLP结合位点的研究 | 第36页 |
| 1.3.3.3 PigE蛋白结构与同源蛋白结构之间的对比分析 | 第36-40页 |
| 1.4 讨论 | 第40-41页 |
| 1.5 小结 | 第41-43页 |
| 第二章 灵菌红素生物合成途径中PigD和PigB蛋白的表达、纯化及结晶条件的初筛 | 第43-69页 |
| 2.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 2.1.1 质粒及菌株 | 第43页 |
| 2.1.2 培养基 | 第43页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第43页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 2.2.1 Serratia sp. FS14中pigD基因表达质粒的构建及蛋白纯化 | 第44-45页 |
| 2.2.1.1 引物的设计与PCR扩增 | 第44页 |
| 2.2.1.2 pigD基因PCR扩增产物的纯化 | 第44页 |
| 2.2.1.3 pET24b-PigD表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 2.2.1.4 pET24b-PigD的筛选及鉴定 | 第45页 |
| 2.2.1.5 pigD基因编码的蛋白质结构特征分析 | 第45页 |
| 2.2.1.6 重组PigD蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第45页 |
| 2.2.1.7 重组PigD蛋白的小量纯化及包涵体检测 | 第45页 |
| 2.2.1.8 重组PigD蛋白的稳定性研究 | 第45页 |
| 2.2.1.9 重组PigD蛋白的大量纯化 | 第45页 |
| 2.2.2 Serratia sp. FS14中PigD蛋白结晶条件的初步筛选 | 第45-46页 |
| 2.2.3 Serratia sp. FS14中pigB基因表达质粒的构建及表达蛋白纯化 | 第46-48页 |
| 2.2.3.1 引物设计与PCR扩增 | 第46-47页 |
| 2.2.3.2 pET24b-PigB表达载体的构建 | 第47页 |
| 2.2.3.3 重组质粒pET24b-PigB筛选及鉴定 | 第47页 |
| 2.2.3.4 pigB基因编码蛋白的结构特征分析 | 第47页 |
| 2.2.3.5 重组PigB蛋白的诱导表达及小量纯化 | 第47页 |
| 2.2.3.6 重组PigB蛋白的小量纯化 | 第47-48页 |
| 2.2.4 Serratia sp. FS14中pigB基因膜外截短部分表达质粒的构建及蛋白的纯化 | 第48页 |
| 2.2.4.1 截短引物的设计与PCR扩增 | 第48页 |
| 2.2.4.2 pET24b-PigB-mowai表达载体的构建 | 第48页 |
| 2.2.4.3 重组质粒pET24b-PigB-mowai的筛选及鉴定 | 第48页 |
| 2.2.4.4 pigB-mowai基因编码的蛋白结构特征分析 | 第48页 |
| 2.2.4.5 重组pET24b-PigB-mowai蛋白的诱导表达及小量纯化 | 第48页 |
| 2.2.4.6 重组pET24b-PigB-mowai蛋白的大量纯化 | 第48页 |
| 2.2.5 Serratia sp. FS14中PigB膜外截短部分的结晶条件初步筛选 | 第48-49页 |
| 2.3 结果分析 | 第49-66页 |
| 2.3.1 Serratia sp. FS14中pigD基因表达质粒的构建及表达蛋白纯化 | 第49-55页 |
| 2.3.1.1 pigD表达基因的克隆与鉴定 | 第49-50页 |
| 2.3.1.2 pigD基因编码的蛋白质结构特征分析 | 第50页 |
| 2.3.1.3 pET24b-PigD重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达,小量纯化与包涵体检测 | 第50-52页 |
| 2.3.1.4 PigD蛋白稳定性的研究 | 第52-53页 |
| 2.3.1.5 重组PigD蛋白的大量纯化 | 第53-55页 |
| 2.3.2 Serratia sp. FS14中PigD蛋白结晶条件的初步筛选 | 第55页 |
| 2.3.3 Serratia sp. FS14中pigB基因表达质粒的构建及表达蛋白纯化 | 第55-58页 |
| 2.3.3.1 pigB基因的克隆与鉴定 | 第55-56页 |
| 2.3.3.2 pigB基因编码的蛋白质结构特征分析 | 第56-57页 |
| 2.3.3.3 pET24b-PigB重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达与小量纯化 | 第57-58页 |
| 2.3.4 Serratia sp. FS14中pigB基因膜外截短部分的重组质粒的构建及表达蛋白的纯化 | 第58-64页 |
| 2.3.4.1 pigB-mowai基因的克隆与鉴定 | 第58-60页 |
| 2.3.4.2 pigB-mowai基因编码蛋白质的结构特征分析 | 第60-61页 |
| 2.3.4.3 PigB-mowai重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达,小量纯化与包涵体检测 | 第61-62页 |
| 2.3.4.4 PigB-mowai重组质粒在大肠杆菌中表达蛋白的大量纯化 | 第62-64页 |
| 2.3.5 Serratia sp. FS14中PigB-mowai蛋白结晶条件初筛及晶体鉴定 | 第64-66页 |
| 2.4 讨论 | 第66-67页 |
| 2.5 小结 | 第67-69页 |
| 全文总结 | 第69-71页 |
| 论文创新点 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-75页 |
| 附录 | 第75-83页 |
| 发表论文 | 第83-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
