| 英文縮略词表 | 第3-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第14-19页 |
| 第一部分 HCC肿瘤组织中IL-6表达水平和血管再生之间的联系 | 第19-41页 |
| 1.1 实验材料 | 第19-24页 |
| 1.1.1 组织标本及主要试剂 | 第19-21页 |
| 1.1.2 实验工作液配制 | 第21-23页 |
| 1.1.3 实验所需仪器 | 第23-24页 |
| 1.2 实验方法 | 第24-33页 |
| 1.2.1 C57小鼠二乙基亚硝胺(DEN)慢性诱导性HCC动物模型建立 | 第24页 |
| 1.2.2 人HCC组织标本收集 | 第24-25页 |
| 1.2.3 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测 | 第25页 |
| 1.2.4 实时荧光定量(Real-time)PCR检测 | 第25-27页 |
| 1.2.5 蛋白免疫印迹实验(western-Blotting)检测 | 第27-30页 |
| 1.2.6 免疫组织化学(IHC)检测 | 第30-33页 |
| 1.2.7 统计结果分析与处理 | 第33页 |
| 1.3 实验结果 | 第33-40页 |
| 1.3.1 C57小鼠DEN慢性诱导性HCC肿瘤组织中IL-6水平检测 | 第33-35页 |
| 1.3.2 C57小鼠DEN慢性诱导性HCC肿瘤组织中血管再生相关因子表达水平 | 第35-36页 |
| 1.3.3 人HCC肿瘤组织中血管相关因子蛋白表达水平及与IL-6含量相关性 | 第36-38页 |
| 1.3.4 IHC检测人HCC肿瘤组织中IL-6,CD31,VEGF表达水平及相关性 | 第38-40页 |
| 1.4 结论及其意义 | 第40-41页 |
| 第二部分 体内及体外过表达IL-6后对HCC血管再生的调节 | 第41-66页 |
| 2.1 实验材料 | 第41-45页 |
| 2.1.1 细胞株及主要试剂 | 第41-43页 |
| 2.1.2 实验工作液配置 | 第43页 |
| 2.1.3 实验所需仪器 | 第43-45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-51页 |
| 2.2.1 细胞复苏,培养与冻存 | 第45-47页 |
| 2.2.2 质粒DNA的扩增与提取 | 第47-48页 |
| 2.2.3 小鼠异体移植肿瘤动物模型建立 | 第48页 |
| 2.2.4 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测 | 第48页 |
| 2.2.5 实时荧光定量(Real-time)PCR检测 | 第48页 |
| 2.2.6 蛋白免疫印迹实验(Western-Blotting)检测 | 第48页 |
| 2.2.7 细胞活性实验(cell viability assay) | 第48-49页 |
| 2.2.8 细胞增殖实验(BrdU proliferation assay) | 第49页 |
| 2.2.9 细胞迁移实验(cell migration assay) | 第49页 |
| 2.2.10 体外血管形成实验(in vitro angiogenesis assay) | 第49-51页 |
| 2.2.11 统计结果分析与处理 | 第51页 |
| 2.3 实验结果 | 第51-65页 |
| 2.3.1 异体移植肿瘤经质粒转染过表达IL-6后的鉴定结果 | 第51-52页 |
| 2.3.2 异体移植肿瘤过表达IL-6后对肿瘤的影响 | 第52-53页 |
| 2.3.3 异体移植肿瘤经质粒转染过表达IL-6后血管再生相关因子表达水平比较 | 第53-56页 |
| 2.3.4 HCC细胞株经质粒转染过表达IL-6后的鉴定结果 | 第56-57页 |
| 2.3.5 HCC细胞株过表达IL-6后的条件培养液对HUVEC细胞活力的影响 | 第57-58页 |
| 2.3.6 HCC细胞株过表达IL-6后的条件培养液对HUVEC细胞增殖的影响 | 第58-60页 |
| 2.3.7 HCC细胞株过表达IL-6后的条件培养液对HUVEC细胞迁移力的影响 | 第60-63页 |
| 2.3.8 HCC细胞株过表达IL-6后的条件培养液对HUVEC细胞血管再生能力的影响 | 第63-65页 |
| 2.4 结论及其意义 | 第65-66页 |
| 第三部分 HCC细胞株中IL-6基因抑制后对HUVEC细胞血管再生的调节 | 第66-77页 |
| 3.1 实验材料 | 第66页 |
| 3.1.1 细胞株及主要试剂 | 第66页 |
| 3.1.2 实验工作液配置 | 第66页 |
| 3.1.3 实验所需仪器 | 第66页 |
| 3.2 实验方法 | 第66-67页 |
| 3.2.1 细胞复苏,培养冻存与转染 | 第66-67页 |
| 3.2.2 质粒DNA的构建,提取与转染 | 第67页 |
| 3.2.3 小分子RNA(SiRNA)干扰技术 | 第67页 |
| 3.2.4 细胞活性实验(cell viability assay) | 第67页 |
| 3.2.5 细胞增殖实验(BrdU proliferation assay) | 第67页 |
| 3.2.6 细胞迁移实验(cell migration assay) | 第67页 |
| 3.2.7 体外血管形成实验(in vitro angiogenesis assay) | 第67页 |
| 3.2.8 统计结果分析与处理 | 第67页 |
| 3.3 实验结果 | 第67-75页 |
| 3.3.1 HCC细胞株经siRNA-IL6基因沉默后的鉴定结果 | 第67-68页 |
| 3.3.2 HCC细胞株经siRNA-IL-6基因沉默后的条件培养液对HUVEC细胞活性的影响 | 第68-69页 |
| 3.3.3 HCC细胞株经siRNA-IL-6基因沉默后条件培养液对HUVEC细胞增殖的影响 | 第69-71页 |
| 3.3.4 HCC细胞株经siRNA-IL-6基因沉默后条件培养液对HUVEC细胞迁移的影响 | 第71-73页 |
| 3.3.5 HCC细胞株经siRNA-IL-6基因沉默后条件培养液对HUVEC细胞血管再生的影响 | 第73-75页 |
| 3.4 结论及其意义 | 第75-77页 |
| 第四部分 索拉菲尼耐药机制研究 | 第77-82页 |
| 4.1 实验材料 | 第77页 |
| 4.1.1 细胞株及主要试剂 | 第77页 |
| 4.1.2 实验工作液配置 | 第77页 |
| 4.1.3 实验所需仪器 | 第77页 |
| 4.2 实验方法 | 第77-78页 |
| 4.2.1 细胞复苏,培养与冻存 | 第77页 |
| 4.2.2 细胞活性实验(cell viability assay) | 第77页 |
| 4.2.3 蛋白免疫印迹实验(Western-Blotting)检测 | 第77页 |
| 4.2.4 索拉菲尼耐药细胞株建立 | 第77-78页 |
| 4.2.5 统计结果分析与处理 | 第78页 |
| 4.3 实验结果 | 第78-80页 |
| 4.3.1 HUH7索拉菲尼耐药细胞株与对照组细胞活性比较 | 第78-79页 |
| 4.3.2 HUH7索拉菲尼耐药细胞株JAK/STAT蛋白表达水平 | 第79-80页 |
| 4.4 结论及其意义 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 攻读学位期间成果 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
