| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 1. 前言 | 第12-19页 |
| ·维生素C的合成途径 | 第12-14页 |
| ·维生素C在植物中的代谢 | 第14页 |
| ·维生素C在植物中的功能 | 第14-15页 |
| ·植物中维生素C生物合成的调控 | 第15-16页 |
| ·COP9信号复合体和JAB1 | 第16-18页 |
| ·研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2. 材料和方法 | 第19-47页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·试剂与酶 | 第19-20页 |
| ·质粒、菌株和载体 | 第20页 |
| ·主要仪器与设备 | 第20页 |
| ·常用培养基和试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·酵母双杂交实验所用培养基及缓冲液配制 | 第21-22页 |
| ·蛋白实验的溶液及缓冲液配制 | 第22-23页 |
| ·农杆菌侵染愈伤组织用于转化的培养基配制 | 第23-26页 |
| ·方法和步骤 | 第26-47页 |
| ·基因的序列比对及克隆 | 第26-31页 |
| ·生物信息学分析 | 第26页 |
| ·水稻种植 | 第26-27页 |
| ·TRNzol法提取总RNA | 第27页 |
| ·RNA琼脂糖电泳检测 | 第27页 |
| ·反转录程序 | 第27-28页 |
| ·引物的设计 | 第28页 |
| ·基因的PCR扩增 | 第28页 |
| ·PCR产物的回收 | 第28-29页 |
| ·pEASY-T1载体与目的片段的连接 | 第29页 |
| ·大肠杆菌(DH5α)的热转化 | 第29页 |
| ·阳性菌落的菌液PCR鉴定 | 第29-30页 |
| ·阳性质粒的提取 | 第30页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·测序 | 第31页 |
| ·OsJAB1与OsVTC1相互作用的酵母双杂交验证 | 第31-37页 |
| ·酵母双杂交诱饵载体的构建和酵母转化后自激活活性检测 | 第31-33页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·质粒的酵母转化及阳性检测 | 第31-32页 |
| ·β-半乳糖苷酶显色实验 | 第32页 |
| ·酵母转化阳性克隆的PCR菌液鉴定 | 第32-33页 |
| ·OsJAB1-pGADT7和OsVTC1-pGBKT7的酵母双杂交 | 第33-35页 |
| ·质粒的共转化酵母 | 第33-34页 |
| ·酵母共转化阳性克隆的PCR菌液鉴定 | 第34页 |
| ·β-半乳糖苷酶印迹实验 | 第34-35页 |
| ·OsJAB1和OsVTC1互换载体及其不同保守区的酵母双杂交 | 第35-37页 |
| ·引物的设计 | 第35-36页 |
| ·载体的构建 | 第36页 |
| ·互换载体和OsJAB1不同保守区的酵母双杂交实验 | 第36页 |
| ·酵母双杂交报告基因β-半乳糖苷酶活性测定 | 第36-37页 |
| ·OsVTC1不同保守区与OsJAB1相互作用的酵母双杂交 | 第37页 |
| ·OsJAB1与OsVTC1互作的pull-down实验验证 | 第37-42页 |
| ·引物的设计 | 第38页 |
| ·原核表达载体构建 | 第38-39页 |
| ·电击BL21原核表达感受态的制备 | 第39页 |
| ·电击转化BL21原核表达感受态细胞 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的原核诱导表达和纯化 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测蛋白 | 第40-41页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第41页 |
| ·蛋白质的Western Blot检测 | 第41-42页 |
| ·OsJAB1与OsVTC1的pull-down实验 | 第42页 |
| ·OsJAB1的基因表达 | 第42-43页 |
| ·引物的设计 | 第42页 |
| ·不同条件下处理水稻幼苗 | 第42-43页 |
| ·荧光定量PCR(Real-time PCR)技术 | 第43页 |
| ·不同处理下基因表达的分析 | 第43页 |
| ·OsJAB1转基因材料的创建 | 第43-47页 |
| ·引物的设计 | 第43-44页 |
| ·水稻愈伤组织的培养 | 第44-45页 |
| ·电击农杆菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·电击农杆菌感受态细胞的转化 | 第45页 |
| ·愈伤组织的侵染及转基因的过程 | 第45-46页 |
| ·DNA的提取 | 第46页 |
| ·植物总蛋白的提取及浓度的测定 | 第46-47页 |
| ·转基因水稻的维生素C的测定 | 第47页 |
| ·维生素C标准曲线的制作 | 第47页 |
| ·维生素C的提取及测定 | 第47页 |
| 3. 结果和分析 | 第47-64页 |
| ·OsJAB1的序列分析及基因全长序列的克隆 | 第47-50页 |
| ·OsJAB1的生物信息学分析 | 第47-48页 |
| ·OsJAB1的克隆 | 第48-50页 |
| ·水稻总RNA的提取及反转录 | 第48-49页 |
| ·OsJAB1的扩增及克隆 | 第49-50页 |
| ·OsJAB1与OsVTC1的相互作用的酵母双杂交验证 | 第50-54页 |
| ·OsVTC1-pGBKT7及OsJAB1-pGBKT7的酵母转化后自激活活性检测 | 第50-51页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第51-54页 |
| ·OsJAB1、OsJAB1-N端、C端和OsVTC1的酵母双杂交 | 第51-52页 |
| ·OsJAB1与OsVTC1互换载体的酵母双杂交 | 第52-53页 |
| ·OsJAB1、OsJAB1-N、-C端和OsVTC1及其载体互换酵母双杂交的β-半乳糖苷酶活性测定 | 第53-54页 |
| ·OsVTC1、OsVTC1-N、C端与OsJAB1的酵母双杂交 | 第54页 |
| ·OsJAB1与OsVTC1互作的pull-down实验验证 | 第54-56页 |
| ·OsJAB1的基因表达分析 | 第56-58页 |
| ·OsJAB1的组织特异性表达 | 第56页 |
| ·OsJAB1在光周期下的表达 | 第56-57页 |
| ·OsJAB1在水稻幼苗叶片持续光、暗条件下表达 | 第57-58页 |
| ·OsJAB1转基因水稻株系的鉴定和维生素C含量的测定 | 第58-64页 |
| ·农杆菌侵染水稻愈伤组织的基因转化 | 第58-59页 |
| ·干扰载体的鉴定及转化的农杆菌PCR鉴定 | 第59页 |
| ·OsJAB1干扰RANi转基因水稻株系的鉴定 | 第59-60页 |
| ·OsJAB1干扰转基因株系的维生素C含量的测定 | 第60-62页 |
| ·OsJAB1过表达载体的鉴定及转化的农杆菌PCR鉴定 | 第62-63页 |
| ·OsJAB1过表达转基因水稻株系的鉴定 | 第63页 |
| ·OsJAB1过表达转基因水稻株系的维生素C含量测定 | 第63-64页 |
| 4. 总结 | 第64-67页 |
| ·结论 | 第64-66页 |
| ·讨论 | 第66页 |
| ·本研究的后续补充实验 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 缩略词表 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
