| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| 1.1 碳酸酐酶的介绍 | 第11-19页 |
| 1.1.1 碳酸酐酶的基本性状 | 第11-12页 |
| 1.1.2 碳酸酐酶的各种类型及其来源 | 第12页 |
| 1.1.3 碳酸酐酶的结构及其催化机制 | 第12-16页 |
| 1.1.4 碳酸酐酶的酶活性测定方法 | 第16-17页 |
| 1.1.5 碳酸酐酶当前的一些应用 | 第17-19页 |
| 1.2 二氧化碳的捕集技术 | 第19-23页 |
| 1.2.1 吸附法 | 第20页 |
| 1.2.2 CO_2的膜分离法 | 第20-21页 |
| 1.2.3 溶剂吸收法 | 第21-22页 |
| 1.2.4 其他方法 | 第22-23页 |
| 1.3 耐热型碳酸酐酶在二氧化碳捕集技术中的应用前景 | 第23-24页 |
| 1.4 耐热型碳酸酐酶的研究现状 | 第24页 |
| 1.5 本课题的研究依据和内容 | 第24-26页 |
| 第二章 Methanocella conradii HZ254菌株的碳酸酐酶的克隆、重组和表达 | 第26-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-30页 |
| 2.1.1 目的基因、菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基和溶液 | 第26-28页 |
| 2.1.3 限制性内切酶和试剂盒 | 第28页 |
| 2.1.4 试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.2.1 重组表达质粒的构建策略 | 第30-31页 |
| 2.2.2 目的基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.3 重组表达质粒构建 | 第32-33页 |
| 2.2.4 重组表达载体的转化及阳性克隆的检测 | 第33-34页 |
| 2.2.5 碳酸酐酶的表达及表达产物的SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第35-38页 |
| 2.3.1 PCR扩增目的基因 | 第35页 |
| 2.3.2 重组表达载体pET-24a-mtc的鉴定 | 第35-37页 |
| 2.3.3 表达产物的SDS-PAGE电泳分析 | 第37-38页 |
| 2.4 实验小结 | 第38-39页 |
| 第三章 重组表达载体诱导表达碳酸酐酶的初步条件优化 | 第39-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第40页 |
| 3.1.2 培养基和溶液 | 第40页 |
| 3.1.3 试剂 | 第40-41页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.2.1 菌株的活化和培养 | 第41-42页 |
| 3.2.2 诱导剂IPTG浓度的优化 | 第42页 |
| 3.2.3 诱导温度的优化 | 第42页 |
| 3.2.4 添加诱导剂开始诱导的时机的优化 | 第42页 |
| 3.2.5 诱导培养时长的优化 | 第42-43页 |
| 3.2.6 诱导条件优化的正交实验 | 第43页 |
| 3.2.7 SDS-PAGE电泳检测重组蛋白的表达量 | 第43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-49页 |
| 3.3.1 工程菌JM109-pET24a-mtc的生长曲线 | 第44页 |
| 3.3.2 诱导剂IPTG添加量的优化 | 第44-45页 |
| 3.3.3 诱导温度的优化 | 第45-46页 |
| 3.3.4 添加诱导剂开始诱导的时机的优化 | 第46-47页 |
| 3.3.5 诱导培养时长的优化 | 第47-48页 |
| 3.3.6 诱导条件优化的正交实验 | 第48-49页 |
| 3.4 实验小结 | 第49-51页 |
| 第四章 重组碳酸酐酶的酶学性质 | 第51-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-54页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第51页 |
| 4.1.2 培养基和主要溶液 | 第51-52页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第52页 |
| 4.1.4 实验试剂 | 第52-54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 菌株的活化和诱导培养 | 第54页 |
| 4.2.2 改良的Wilbur和Anderson电极法测定碳酸酐酶酶活 | 第54-55页 |
| 4.2.3 碳酸酐酶的酯酶活性测定 | 第55页 |
| 4.2.4 温度对重组碳酸酐酶酶活稳定性的影响 | 第55页 |
| 4.2.5 pH对重组碳酸酐酶酶活稳定性的影响 | 第55-56页 |
| 4.2.6 金属离子对重组碳酸酐酶酶活性的影响 | 第56页 |
| 4.2.7 阴离子及抑制剂对重组碳酸酐酶酶活性的影响 | 第56页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第56-62页 |
| 4.3.1 重组碳酸酐酶的酶活 | 第56-57页 |
| 4.3.2 重组碳酸酐酶的酯酶活性 | 第57页 |
| 4.3.3 温度对重组碳酸酐酶酶活稳定性的影响 | 第57-59页 |
| 4.3.4 pH对重组碳酸酐酶酶活稳定性的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.5 金属离子对重组碳酸酐酶酶活的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.6 阴离子及磺胺对重组碳酸酐酶酶活的影响 | 第61-62页 |
| 4.4 实验小结 | 第62-64页 |
| 第五章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 5.1 结论 | 第64-65页 |
| 5.2 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 攻读学位期间发表的学生论文目录 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
