中文摘要 | 第5-8页 |
Abstract | 第8-11页 |
英文缩略词表(Abbreviation) | 第12-13页 |
第一章 引言 | 第13-28页 |
1.1 肥胖与脂肪细胞 | 第13-15页 |
1.1.1 脂肪组织 | 第13-14页 |
1.1.2 脂肪细胞分化机制研究的意义 | 第14-15页 |
1.2 脂肪细胞分化的研究进展 | 第15-19页 |
1.2.1 脂肪细胞的体外研究模型及鉴定识别 | 第15-16页 |
1.2.2 脂肪细胞分化过程 | 第16-17页 |
1.2.3 脂肪细胞分化的转录调控 | 第17-19页 |
1.3 组学技术在脂肪细胞分化研究中的应用 | 第19-27页 |
1.3.1 基因芯片技术及在脂肪细胞分化研究中的应用 | 第19-20页 |
1.3.2 定量蛋白质组学技术及应用 | 第20-25页 |
1.3.3 生物信息技术及其应用 | 第25-27页 |
1.4 小结 | 第27-28页 |
第二章 实验材料和方法 | 第28-41页 |
2.1 材料和仪器 | 第28-31页 |
2.2 实验步骤 | 第31-41页 |
2.2.1 细胞培养及诱导分化 | 第31页 |
2.2.2 FACS(fluorescence-activated cell sorter)测定 | 第31-32页 |
2.2.3 细胞蛋白的提取 | 第32页 |
2.2.4 Bradford法测定蛋白质含量 | 第32页 |
2.2.5 Western blotting | 第32-34页 |
2.2.6 RNA抽提 | 第34页 |
2.2.7 实时定量PCR | 第34-35页 |
2.2.8 RNA干扰 | 第35-36页 |
2.2.9 iTRAQ标记LC-MS/MS测定 | 第36-38页 |
2.2.10 蛋白质的检索鉴定和生物信息学分析 | 第38-41页 |
第三章 实验结果与讨论 | 第41-78页 |
3.1 前脂肪细胞诱导分化及蛋白质筛选模式的设计 | 第41-45页 |
3.1.1 3T3-L1前脂肪细胞培养及诱导分化 | 第41页 |
3.1.2 3T3-L1前脂肪细胞MCE细胞周期检查点的确定 | 第41-43页 |
3.1.3 差异蛋白质筛选模式的设计 | 第43-45页 |
3.2 iTRAQ-2DLC-MS/MS测定3T3-L1前脂肪细胞分化早期蛋白质差异表达 | 第45-60页 |
3.2.1 iTRAQ前处理步骤、检测仪器和鉴定方式的选择 | 第45-49页 |
3.2.2 蛋白质鉴定、相对定量及结果分析 | 第49-55页 |
3.2.3 符合模式的差异蛋白质筛选分析 | 第55-57页 |
3.2.4 定量结果方法学验证 | 第57-60页 |
3.3 脂肪细胞分化MCE中转录调控网络与关键调控因子 | 第60-72页 |
3.3.1 脂肪细胞分化过程中差异表达蛋白的富集分析 | 第60-66页 |
3.3.2 C/EBPβ调控3T3-L1前脂肪细胞MCE靶基因的蛋白质水平筛选 | 第66-68页 |
3.3.3 3T3-L1脂肪细胞分化过程中MCE的转录调控网络分析 | 第68-72页 |
3.4 PKM2在3T3-L1前脂肪细胞分化MCE过程中的作用 | 第72-78页 |
3.4.1 PKM2在3T3-L1前脂肪细胞分化MCE过程中的表达 | 第72-73页 |
3.4.2 抑制PKM2表达对3T3-L1前脂肪细胞MCE的影响 | 第73-74页 |
3.4.3 C/EBPβ在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中对PKM2表达的作用 | 第74-78页 |
第四章 全文总结与展望 | 第78-81页 |
参考文献 | 第81-88页 |
附表 | 第88-128页 |
附表1 595个表达含量变化趋势符合设定模式的蛋白 | 第88-94页 |
附表2 iTRAQ-2DLC-MS/MS定量结果 | 第94-128页 |
致谢 | 第128-129页 |