| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语说明 | 第8-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-38页 |
| 1 肿瘤相关成纤维细胞（CAFs） | 第17-22页 |
| 1.1 肿瘤微环境 | 第17-18页 |
| 1.2 CAFs的来源和特性 | 第18-19页 |
| 1.3 CAFs的作用 | 第19-22页 |
| 2 自噬 | 第22-30页 |
| 2.1 自噬的细胞生物学效应 | 第22-23页 |
| 2.2 自噬与肿瘤微环境 | 第23-28页 |
| 2.3 自噬对肿瘤发生发展的影响 | 第28-30页 |
| 3 转化生长因子（TGF-β） | 第30-34页 |
| 3.1 TGF-β 信号通路 | 第30-31页 |
| 3.2 TGF-β 与CAFs | 第31-33页 |
| 3.3 TGF-β 与自噬 | 第33-34页 |
| 4 目的和意义 | 第34-35页 |
| 5 创新点 | 第35-36页 |
| 6 研究内容 | 第36-38页 |
| 第二章 临床乳腺癌组织TGF-β 和CAFs标 志蛋白 αSMA表 达增加 | 第38-43页 |
| 1 实验材料 | 第38-40页 |
| 1.1 样本来源 | 第38页 |
| 1.2 试剂材料 | 第38-39页 |
| 1.3 主要溶液及缓冲液的配制 | 第39-40页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-41页 |
| 2.1 免疫组织化学法检测肿瘤组织中TGF-β 和 α-SMA的表达情况 | 第40-41页 |
| 2.2 数据统计与分析 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-42页 |
| 3.1 乳腺癌组织中TGF-β 和 α-SMA的表达同步增加 | 第41-42页 |
| 4 讨论与小结 | 第42-43页 |
| 第三章 TGF-β1 缓解血清饥饿条件下NIH3T3细胞损伤，促进CAFs形成 | 第43-54页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第43-46页 |
| 1.1 细胞株来源 | 第43页 |
| 1.2 试剂材料 | 第43-44页 |
| 1.3 主要溶液及缓冲液的配制 | 第44-45页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第45-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-49页 |
| 2.1 细胞的复苏、传代及冻存 | 第46-47页 |
| 2.2 MTT法测定细胞增殖抑制率 | 第47页 |
| 2.3 荧光共聚焦显微镜检测成纤维细胞的线粒体膜电位 | 第47页 |
| 2.4 Western blotting检测CAFs表型相关标志蛋白的表达 | 第47-49页 |
| 2.5 荧光显微镜检测CAFs表型相关标志蛋白的表达 | 第49页 |
| 2.6 数据统计与分析 | 第49页 |
| 3 实验结果 | 第49-52页 |
| 3.1 TGF-β1 提高经血清饥饿处理的成纤维细胞NIH3T3细胞增殖能力 | 第49-50页 |
| 3.2 TGF-β1 提高经血清饥饿处理的成纤维细胞NIH3T3线粒体膜电位 | 第50-51页 |
| 3.3 TGF-β1 提高经血清饥饿处理的成纤维细胞NIH3T3 CAFs标志蛋白α-SMA和FAP-α 的表达 | 第51-52页 |
| 4 小结和讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 TGF-β1 增强血清饥饿条件下NIH3T3细胞的自噬水平 | 第54-69页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第54-58页 |
| 1.1 细胞株来源 | 第54页 |
| 1.2 试剂材料 | 第54-55页 |
| 1.3 主要溶液及缓冲液的配制 | 第55-57页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第57-58页 |
| 2 实验方法 | 第58-64页 |
| 2.1 细胞的复苏、传代及冻存 | 第58页 |
| 2.2 引物 | 第58-59页 |
| 2.3 MDC染色进行细胞自噬的初筛 | 第59页 |
| 2.4 荧光定量PCR | 第59-61页 |
| 2.5 Western blotting检测CAFs表型相关标志蛋白的表达 | 第61-62页 |
| 2.6 激光共聚焦技术检测线粒体自噬 | 第62页 |
| 2.7 透射电子显微镜观察细胞的自噬结构 | 第62-63页 |
| 2.8 数据统计与分析 | 第63-64页 |
| 3 实验结果 | 第64-67页 |
| 3.1 TGF-β1 提高经血清饥饿处理的NIH3T3细胞的MDC阳性率 | 第64页 |
| 3.2 TGF-β1 促进经血清饥饿处理的NIH3T3细胞的自噬相关基因的表达水平 | 第64-65页 |
| 3.3 TGF-β1 促进血清饥饿处理的NIH3T3细胞自噬相关蛋白的表达水平 | 第65-66页 |
| 3.4 TGF-β1 促进经血清饥饿处理的NIH3T3细胞自噬蛋白LC3β 与线粒体的共定位水平 | 第66-67页 |
| 3.5 TGF-β1 增加血清饥饿处理的NIH3T3细胞的自噬结构 | 第67页 |
| 4 小结与讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 TGF-β1 诱导自噬缓解营养剥夺所致成纤维细胞损伤并促进CAFs形成 | 第69-88页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第69-73页 |
| 1.1 细胞株来源 | 第69页 |
| 1.2 试剂材料 | 第69-71页 |
| 1.3 主要溶液及缓冲液的配制 | 第71-72页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第72-73页 |
| 2 实验方法 | 第73-77页 |
| 2.1 细胞的复苏、传代及冻存 | 第73页 |
| 2.2 MTT法测定细胞增殖抑制率 | 第73-74页 |
| 2.3 流式细胞术检测成纤维细胞的线粒体膜电位 | 第74页 |
| 2.4 免疫印迹法检测蛋白的表达 | 第74-75页 |
| 2.5 激光共聚焦技术检测CAFs标志蛋白 α-SMA与自噬蛋白LC3β 共定位情况 | 第75-76页 |
| 2.6 荧光显微镜检测成纤维细胞的线粒体膜电位 | 第76页 |
| 2.7 ATG5的si RNA转染实验 | 第76页 |
| 2.8 Annexin V-FITC/PI双染细胞检测细胞凋亡 | 第76-77页 |
| 2.9 数据统计与分析 | 第77页 |
| 3 实验结果 | 第77-86页 |
| 3.1 TGF-β1 通过诱导自噬提高经血清饥饿处理成纤维细胞NIH3T3的细胞存活率 | 第77-78页 |
| 3.2 TGF-β1 通过诱导自噬能够提高经血清饥饿处理成纤维细胞NIH3T3的线粒体膜电位 | 第78-79页 |
| 3.3 TGF-β1 通过诱导自噬降低经血清饥饿处理成纤维细胞NIH3T3的凋亡相关蛋白的表达水平 | 第79页 |
| 3.4 TGF-β1 通过诱导自噬增强经血清饥饿处理成纤维细胞NIH3T3 CAFs标志蛋白 α-SMA和自噬标志蛋白LC3β 的表达及两者的共定位 | 第79-80页 |
| 3.5 si RNA ATG5后，TGF-β1 不能提高经血清饥饿处理成纤维细胞NIH3T3自噬水平 | 第80-81页 |
| 3.6 si RNA ATG5后，TGF-β1 不能降低经血清饥饿处理成纤维细胞NIH3T3凋亡率和坏死率 | 第81-82页 |
| 3.7 si RNA ATG5后，TGF-β1 不能诱导经血清饥饿处理的成纤维细胞NIH3T3的CAFs表型的形成 | 第82-83页 |
| 3.8 TGF-β1 通过增强营养剥夺状态下Smads信号通路来提高成纤维细胞的自噬水平 | 第83-84页 |
| 3.9 TGF-β1 通过增强营养剥夺状态下Smads信号通路来提高成纤维细胞的CAFs表型形成的作用 | 第84-85页 |
| 3.10 TGF-β1 通过增强营养剥夺状态下Smads信号通路来提高成纤维细胞的线粒体膜电位 | 第85-86页 |
| 4 小结与讨论 | 第86-88页 |
| 第六章 TGF-β1 通过诱导自噬促进混合移植瘤CAFs形成和肿瘤生长 | 第88-106页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第89-93页 |
| 1.1 细胞株及受试动物 | 第89-90页 |
| 1.2 试剂材料 | 第90-91页 |
| 1.3 主要溶液及缓冲液的配制 | 第91-92页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第92-93页 |
| 2 实验方法 | 第93-98页 |
| 2.1 细胞的复苏、传代及冻存 | 第93-94页 |
| 2.2 免疫组化实验检测 α-SMA和FAP-α 的表达 | 第94页 |
| 2.3 免疫印迹法检测蛋白的表达 | 第94-96页 |
| 2.4 免疫荧光法检测乳腺癌肿瘤组织中 α-SMA和LC3β 的表达及共定位情况 | 第96页 |
| 2.5 检测小鼠移植瘤的大小 | 第96-97页 |
| 2.6 HE染色检测肿瘤组织坏死情况 | 第97页 |
| 2.7 tunel染色检测肿瘤组织凋亡情况 | 第97-98页 |
| 2.8 数据统计与分析 | 第98页 |
| 3 实验结果 | 第98-104页 |
| 3.1 TGF-β1 促进混合移植瘤的CAFs表征蛋白 α-SMA和FAP-α 的表达 | 第98-100页 |
| 3.2 TGF-β1 促进混合移植瘤的自噬相关蛋白的表达 | 第100页 |
| 3.3 TGF-β1 促进混合移植瘤的CAFs标志蛋白 α-SMA和自噬蛋白LC3β的表达及其两者的共定位 | 第100-101页 |
| 3.4 TGF-β1 提高混合移植瘤的肿瘤体积和肿瘤重量 | 第101-103页 |
| 3.5 TGF-β1 降低混合移植瘤的坏死率和凋亡率 | 第103-104页 |
| 4 小结和探讨 | 第104-106页 |
| 第七章 总结与展望 | 第106-111页 |
| 1. 问题与讨论 | 第106-107页 |
| 2. 结果与结论 | 第107-109页 |
| 3. 前景与展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-131页 |
| 目录 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
