| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 植物启动子的概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 启动子的结构特征 | 第12页 |
| 1.1.2 启动子的类型 | 第12-14页 |
| 1.2 克隆启动子的方法 | 第14-16页 |
| 1.2.1 常规PCR技术 | 第15页 |
| 1.2.2 接头PCR | 第15页 |
| 1.2.3 反向PCR | 第15页 |
| 1.2.4 热不对称PCR | 第15-16页 |
| 1.2.5 融合引物嵌套PCR | 第16页 |
| 1.3 诱导型启动子功能分析 | 第16-18页 |
| 1.3.1 生物信息学分析 | 第16-17页 |
| 1.3.2 点突变 | 第17页 |
| 1.3.3 瞬时表达分析 | 第17页 |
| 1.3.4 稳定转化分析 | 第17-18页 |
| 1.3.5 酵母单杂技术 | 第18页 |
| 1.3.6 电泳迁移率变动分析 | 第18页 |
| 1.4 盐诱导启动子的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 翅碱蓬中SsDHN基因在盐胁迫下表达特性分析 | 第21-28页 |
| 2.1 试验材料与试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 试验设计的引物 | 第22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 碱蓬幼苗的盐胁迫处理 | 第22页 |
| 2.2.2 碱蓬总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.3 反转录第一链cDNA的合成 | 第23页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR反应 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-26页 |
| 2.3.1 盐胁迫处理的碱蓬总RNA提取 | 第24页 |
| 2.3.2 qRT-PCR引物特异性检测 | 第24-25页 |
| 2.3.3 qRT-PCR数据分析 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 碱蓬SsDHN基因启动子的克隆 | 第28-43页 |
| 3.1 试验材料与试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第28页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第28页 |
| 3.1.3 试剂 | 第28页 |
| 3.1.4 主要仪器设备及生物软件 | 第28-29页 |
| 3.1.5 试验设计的引物 | 第29页 |
| 3.2 试验方法 | 第29-35页 |
| 3.2.1 碱蓬基因组DNA的提取 | 第29页 |
| 3.2.2 SsDHN基因全长的获得 | 第29-30页 |
| 3.2.3 DNA琼脂糖胶回收目的片段 | 第30页 |
| 3.2.4 连接反应 | 第30页 |
| 3.2.5 重组DNA的转化 | 第30页 |
| 3.2.6 筛选阳性克隆 | 第30-31页 |
| 3.2.7 第一次FPNI-PCR | 第31-35页 |
| 3.2.8 SsDHN启动子全长的鉴定 | 第35页 |
| 3.2.9 SsDHN基因启动子的序列分析 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-41页 |
| 3.3.1 SsDHN基因全长的获得 | 第35-36页 |
| 3.3.2 第一次FPNI-PCR结果 | 第36-37页 |
| 3.3.3 第二次FPNI-PCR结果 | 第37-38页 |
| 3.3.4 SsDHN全长启动子的获得 | 第38-39页 |
| 3.3.5 SsDHN基因启动子的序列的元件分子 | 第39-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 翅碱蓬SsDHN基因启动子缺失载体的构建 | 第43-53页 |
| 4.1 试验材料与试剂 | 第43页 |
| 4.1.1 菌种与载体 | 第43页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第43页 |
| 4.2 试验方法 | 第43-48页 |
| 4.2.1 缺失片段引物的设计 | 第43-44页 |
| 4.2.2 pMD18T-SsDHN(p)质粒的提取 | 第44-45页 |
| 4.2.3 PCR法获得5'端各缺失片段 | 第45页 |
| 4.2.4 SsDHN基因的启动子各缺失片段与GUS报告基因表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 4.2.5 重组质粒的检测 | 第47-48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-52页 |
| 4.3.1 pMD18T-SsDHN(p)重组质粒的提取 | 第48页 |
| 4.3.2 PCR法获得缺失片段 | 第48页 |
| 4.3.3 pMD18T-F1/F2/F3/F4重组质粒和pCAMBIA1303质粒的双酶切 | 第48-49页 |
| 4.3.4 重组质粒的检测 | 第49-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 4.4.1 重组质粒载体构建 | 第52-53页 |
| 第五章 SsDHN基因启动子的GUS基因的瞬时表达分析 | 第53-61页 |
| 5.1 试验材料与试剂 | 第53页 |
| 5.1.1 菌种 | 第53页 |
| 5.1.2 试验材料 | 第53页 |
| 5.1.3 试验试剂 | 第53页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第53页 |
| 5.2 试验方法 | 第53-56页 |
| 5.2.1 烟草无菌苗的培养 | 第53-54页 |
| 5.2.2 工程菌的构建 | 第54-55页 |
| 5.2.3 农杆菌介导法转化烟草 | 第55-56页 |
| 5.3 结果与分析 | 第56-58页 |
| 5.3.1 重组质粒转化农杆菌LBA4404的PCR鉴定 | 第56页 |
| 5.3.2 SsDHN基因启动子缺失片段GUS组织化学分析 | 第56-58页 |
| 5.4 讨论 | 第58-61页 |
| 5.4.1 采用农杆菌介导法转化烟草的转化效率 | 第58-59页 |
| 5.4.2 SsDHN基因启动子缺失片段GUS组织染色分析 | 第59页 |
| 5.4.3 SsDHN启动子作用元件的分析 | 第59-61页 |
| 第六章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读硕士期间发表文章 | 第69页 |
