| 中文摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-21页 |
| 第一章 LRG1与结直肠癌临床病理、生存预后及MVD的相关性分析 | 第21-37页 |
| 1 病例与材料 | 第21-22页 |
| 1.1 临床病例收集 | 第21-22页 |
| 1.2 主要仪器 | 第22页 |
| 1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.1 制作组织微阵列 | 第22-24页 |
| 2.2 免疫组织化学染色 | 第24-25页 |
| 2.3 统计学分析 | 第25-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-34页 |
| 3.1 病例资料 | 第26页 |
| 3.2 结直肠癌组织中LRG1表达定位及与临床病理参数的相关性分析 | 第26-29页 |
| 3.3 LRGl表达水平是Ⅲ期结直肠癌生存的独立预后因素 | 第29-32页 |
| 3.4 LRG1与CD34-MVD的相关性分析 | 第32-34页 |
| 4 讨论 | 第34-37页 |
| 第二章 LRG1影响结直肠癌血管生成的体外研究 | 第37-59页 |
| 1 实验材料 | 第37-39页 |
| 1.1 主要仪器 | 第37页 |
| 1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 1.3 细胞来源 | 第38页 |
| 1.4 质粒构建 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-44页 |
| 2.1 细胞培养 | 第39-40页 |
| 2.2 LRG1敲降、过表达结直肠癌细胞系的建立 | 第40页 |
| 2.3 Western Blot验证 | 第40-42页 |
| 2.4 实时定量荧光PCR (Real-time PCR) | 第42-43页 |
| 2.5 MMT(四甲基偶氮唑比色法)检测 | 第43页 |
| 2.6 Wound Healing划痕实验 | 第43页 |
| 2.7 侵袭和迁移实验 | 第43-44页 |
| 2.8 HUVECs成管实验 | 第44页 |
| 2.9 统计方法 | 第44页 |
| 3 实验结果 | 第44-55页 |
| 3.1 Western Blot检测结直肠癌细胞系LRG1蛋白表达情况 | 第44-45页 |
| 3.2 LRG1过表达和敲降稳转细胞系的建立和检测 | 第45-50页 |
| 3.3 探索LRG1对结直肠癌细胞体外功能的影响 | 第50-52页 |
| 3.4 LRG1对结直肠癌细胞上清液诱导的HUVECs体外增殖能力的影响 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 第三章 LRG1影响结直肠癌血管生成的体内研究 | 第59-67页 |
| 1 实验材料 | 第59页 |
| 1.1 主要仪器 | 第59页 |
| 1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 1.3 细胞来源及培养 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-60页 |
| 2.1 裸鼠准备 | 第59页 |
| 2.2 裸鼠皮下成瘤模型的建立 | 第59-60页 |
| 2.3 标本处理 | 第60页 |
| 3 实验结果 | 第60-64页 |
| 3.1 LRG1基因敲降对裸鼠结直肠癌皮下成瘤的影响 | 第60-61页 |
| 3.2 LRG1对裸鼠皮下成瘤CD34、VEGFA表达的影响 | 第61-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 LRG1促进结直肠癌血管生成机制的初步研究 | 第67-79页 |
| 1 实验材料 | 第67-68页 |
| 1.1 主要仪器 | 第67页 |
| 1.2 主要试剂 | 第67页 |
| 1.3 细胞来源及培养 | 第67-68页 |
| 2 实验方法 | 第68-69页 |
| 2.1 ELISA | 第68页 |
| 2.2 细胞质、核蛋白分离提取实验 | 第68-69页 |
| 2.3 Western Blot | 第69页 |
| 2.4 统计学 | 第69页 |
| 3 实验结果 | 第69-74页 |
| 3.1 LRG1影响结直肠癌细胞表达和分泌VEGFA | 第69-71页 |
| 3.2 LRG1通过PI3K/AKT和MEK/ERK通路调节VEGFA表达 | 第71-73页 |
| 3.3 抑制AKT和ERK通路可以逆转LRG1促血管生成作用 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-79页 |
| 参考文献 | 第79-91页 |
| 文献综述 | 第91-99页 |
| 参考文献 | 第95-99页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
