| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 术语及符号说明 | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 芳环加氧酶 | 第12-14页 |
| 1.1.1 芳环加氧酶的获取 | 第12-13页 |
| 1.1.2 芳环加氧酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 酚类化合物的微生物降解研究概况 | 第14-21页 |
| 1.2.1 酚类污染物的危害 | 第14-16页 |
| 1.2.2 酚类污染物的治理 | 第16页 |
| 1.2.3 酚类降解微生物 | 第16-17页 |
| 1.2.4 苯酚降解途径 | 第17-20页 |
| 1.2.5 苯酚降解相关基因 | 第20-21页 |
| 1.3 邻苯二酚双加氧酶研究概况 | 第21-25页 |
| 1.3.1 邻苯二酚 2,3-双加氧酶 | 第21-22页 |
| 1.3.2 邻苯二酚 1,2-双加氧酶的分类和来源 | 第22-23页 |
| 1.3.3 邻苯二酚 1,2-双加氧酶的结构与催化机制 | 第23-25页 |
| 1.3.4 邻苯二酚 1,2-双加氧酶的酶活测定方法 | 第25页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 1.5 研究内容 | 第26-28页 |
| 第2章 倭蜂猴粪便微生物苯酚羟化酶和邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因多样性研究 | 第28-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 样品、菌株和载体 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.4 常用溶液 | 第29页 |
| 2.1.5 常用培养基 | 第29页 |
| 2.1.6 DNA测序及引物合成 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-36页 |
| 2.2.1 样品的采集及保存 | 第30页 |
| 2.2.2 倭蜂猴粪便微生物宏基因组DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.3 芳环加氧酶基因片段的扩增及纯化 | 第30-32页 |
| 2.2.4 苯酚羟化酶、邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因片段文库的构建 | 第32-35页 |
| 2.2.5 苯酚羟化酶、邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因多样性分析 | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第36-49页 |
| 2.3.1 倭蜂猴粪便微生物宏基因组DNA的提取 | 第36页 |
| 2.3.2 芳环加氧酶基因片段的扩增 | 第36-37页 |
| 2.3.3 苯酚羟化酶、邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因片段文库的构建 | 第37-39页 |
| 2.3.4 苯酚羟化酶、邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因多样性分析 | 第39-49页 |
| 2.4 讨论 | 第49-51页 |
| 2.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第3章 邻苯二酚 1,2-双加氧酶全长基因克隆及异源表达 | 第52-66页 |
| 3.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第52页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 3.1.4 常用溶液 | 第52页 |
| 3.1.5 常用培养基 | 第52页 |
| 3.1.6 DNA测序及引物合成 | 第52-53页 |
| 3.2 实验方法 | 第53-58页 |
| 3.2.1 目标基因序列的选择 | 第53页 |
| 3.2.2 邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因侧翼序列的获取 | 第53-55页 |
| 3.2.3 序列分析 | 第55-56页 |
| 3.2.4 邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因catPL12的异源表达 | 第56-58页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第58-64页 |
| 3.3.1 目标基因序列的选择 | 第58-59页 |
| 3.3.2 邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因侧翼序列的获取 | 第59-60页 |
| 3.3.3 序列分析 | 第60-63页 |
| 3.3.4 邻苯二酚 1,2-双加氧酶基因catPL12的异源表达 | 第63-64页 |
| 3.4 讨论 | 第64-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 第4章 重组酶catPL12的纯化及酶学性质研究 | 第66-85页 |
| 4.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第66页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第66页 |
| 4.1.3 常用溶液 | 第66-67页 |
| 4.2 实验方法 | 第67-72页 |
| 4.2.1 重组酶catPL12的纯化和鉴定 | 第67-69页 |
| 4.2.2 重组酶catPL12酶活测定方法 | 第69-70页 |
| 4.2.3 HPLC检测重组酶catPL12活性 | 第70页 |
| 4.2.4 重组酶catPL12酶学性质研究 | 第70-72页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第72-81页 |
| 4.3.1 重组酶catPL12的纯化及鉴定 | 第72-74页 |
| 4.3.2 HPLC检测重组酶catPL12活性 | 第74-76页 |
| 4.3.3 重组酶catPL12的酶学性质研究 | 第76-81页 |
| 4.4 讨论 | 第81-83页 |
| 4.5 本章小结 | 第83-85页 |
| 第5章 总结与展望 | 第85-88页 |
| 5.1 总结 | 第85-86页 |
| 5.2 创新 | 第86-87页 |
| 5.3 展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 附录 | 第97-102页 |
| 附录A 实验中所使用的缓冲液的配制 | 第97-99页 |
| A1 不同pH值的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配制 | 第97页 |
| A2 不同pH值的甘氨酸-Na OH缓冲液的配制 | 第97-98页 |
| A3 不同pH值的Tris-HCl缓冲液的配制 | 第98-99页 |
| 附录B 邻苯二酚 1,2-双加氧酶catPL12核苷酸序列及氨基酸序列 | 第99-101页 |
| B1 catPL12的核苷酸序列 | 第99-100页 |
| B2 catPL12的氨基酸序列 | 第100-101页 |
| 附录C 氨基酸中英文对照及缩写表 | 第101-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
