| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 符号说明 | 第15-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-37页 |
| 1.1 糖类概述 | 第18-20页 |
| 1.1.1 糖的定义及分类 | 第18页 |
| 1.1.2 细菌多糖 | 第18-19页 |
| 1.1.3 大肠杆菌脂多糖 | 第19-20页 |
| 1.2 大肠杆菌O抗原 | 第20-25页 |
| 1.2.1 大肠杆菌O抗原的结构 | 第20-21页 |
| 1.2.2 大肠杆菌合成O抗原的基因簇 | 第21-22页 |
| 1.2.3 大肠杆菌O抗原的合成过程 | 第22-23页 |
| 1.2.4 Wzz简介 | 第23-25页 |
| 1.3 N-连接糖基化系统 | 第25-28页 |
| 1.3.1 真核生物N-连接糖基化 | 第25-26页 |
| 1.3.2 原核生物中N-连接糖基化 | 第26-27页 |
| 1.3.3 细菌的寡糖基转移酶PglB | 第27-28页 |
| 1.4 同源重组技术 | 第28-31页 |
| 1.4.1 同源重组技术简介 | 第28页 |
| 1.4.2 基因敲除的一般步骤 | 第28-29页 |
| 1.4.3 同源重组在克隆技术上的应用 | 第29-31页 |
| 1.5 糖类疫苗的研究 | 第31-33页 |
| 1.5.1 多糖疫苗 | 第31-32页 |
| 1.5.2 糖蛋白结合疫苗 | 第32-33页 |
| 1.6 糖蛋白的合成 | 第33-37页 |
| 1.6.1 糖蛋白的化学合成法 | 第33页 |
| 1.6.2 糖蛋白的生物合成法 | 第33-37页 |
| 第二章 糖蛋白的生物合成 | 第37-53页 |
| 2.1 引言 | 第37-38页 |
| 2.2 实验材料 | 第38-40页 |
| 2.2.1 菌株和载体 | 第38页 |
| 2.2.2 酶和耗材 | 第38-39页 |
| 2.2.3 培养基与缓冲液 | 第39-40页 |
| 2.2.4 仪器设备 | 第40页 |
| 2.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 2.3.1 利用Red同源重组进行基因敲除 | 第40-42页 |
| 2.3.2 载体构建 | 第42-43页 |
| 2.3.3 表达菌株的构建及糖蛋白的纯化 | 第43-46页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第46-52页 |
| 2.4.1 基因敲除菌株E.coli W3110△waal的构建 | 第46页 |
| 2.4.2 载体蛋白及糖基转移酶基因的克隆 | 第46-48页 |
| 2.4.3 载体pYESIL-O157 rfb的构建 | 第48页 |
| 2.4.4 表达菌株的构建及糖蛋白的纯化 | 第48-50页 |
| 2.4.5 糖蛋白的Western blot验证 | 第50-51页 |
| 2.4.6 糖蛋白的质谱分析 | 第51-52页 |
| 2.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第三章 糖蛋白糖链长短调节的初步探索 | 第53-67页 |
| 3.1 引言 | 第53-54页 |
| 3.2 实验材料 | 第54-55页 |
| 3.2.1 菌株和载体 | 第54页 |
| 3.2.2 酶和耗材 | 第54页 |
| 3.2.3 仪器设备 | 第54-55页 |
| 3.2.4 培养基与缓冲液 | 第55页 |
| 3.3 实验方法 | 第55-61页 |
| 3.3.1 利用Red同源重组进行基因敲除 | 第55-56页 |
| 3.3.2 载体构建 | 第56-57页 |
| 3.3.3 利用RedE/T技术直接克隆大片段 | 第57-59页 |
| 3.3.4 利用同源重组技术对载体进行修饰 | 第59-60页 |
| 3.3.5 LPS的提取及银染 | 第60-61页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第61-66页 |
| 3.4.1 基因敲除菌株E. coli W3110△waal△wzz的构建 | 第61-62页 |
| 3.4.2 不同来源wzz基因的克隆 | 第62页 |
| 3.4.3 E. coli O157：H7O抗原基因簇的构建(不含wzz基因) | 第62-64页 |
| 3.4.4 p15A-157 antigen载体的表达验证 | 第64-65页 |
| 3.4.5 p15A-157 antigen载体的修饰 | 第65-66页 |
| 3.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 全文总结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第79-80页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第80页 |
