| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-14页 |
| 1. 前言 | 第14-29页 |
| ·A群链球菌 | 第14-24页 |
| ·A群链球菌的毒力因子及其致病性 | 第14页 |
| ·GAS与纤溶酶原的相互作用 | 第14-24页 |
| ·纤溶酶原的结构和功能 | 第17页 |
| ·Plg激活的调节 | 第17-20页 |
| ·A群链球菌的纤溶酶原受体 | 第20-21页 |
| ·Plg与GAS的结合和激活途径 | 第21-22页 |
| ·Plg(Pm)是GAS的致病因子之 | 第22-24页 |
| ·脂蛋白(a)[Lp(a)] | 第24-29页 |
| ·Lp(a)的结构和代谢 | 第24-26页 |
| ·Lp(a)的生理功能 | 第26页 |
| ·Lp(a)的致病性 | 第26-27页 |
| ·Lp(a)与心脑血管病的关系 | 第26页 |
| ·Lp(a)与其他疾病的关系 | 第26-27页 |
| ·Lp(a)在纤溶系统中的作用 | 第27-28页 |
| ·Lp(a)的抗感染作用假说(创新点) | 第28-29页 |
| 2 实验材料 | 第29-35页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30-35页 |
| ·化学试剂 | 第30-31页 |
| ·试剂盒和标准品 | 第31-32页 |
| ·填料及纯化缓冲液 | 第32页 |
| ·化学贮存液的配制 | 第32-34页 |
| ·常用溶液 | 第32-33页 |
| ·培养基的配制 | 第33页 |
| ·电泳试剂的配制 | 第33-34页 |
| ·菌株 | 第34页 |
| ·PCR引物 | 第34-35页 |
| 3 实验方法 | 第35-53页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第35-45页 |
| ·A群链球菌CMCC32175基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
| ·M6表面SEN基因的扩增 | 第36-37页 |
| ·SEN基因扩增产物的纯化 | 第37页 |
| ·SEN基因片断的酶切及纯化 | 第37-38页 |
| ·pASK-IBA37载体的酶切及纯化 | 第38页 |
| ·酶切SEN基因片段与pASK-IBA37载体的连接 | 第38页 |
| ·pASK-IBA37-SEN转化感受态E.coli JM109 | 第38-39页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| ·转化 | 第39页 |
| ·菌落PCR鉴定转化阳性的菌落 | 第39页 |
| ·提取pASK-IBA37-SEN质粒 | 第39-41页 |
| ·pASK-IBA37-SEN重组质粒转化E.coli BL21 | 第41页 |
| ·SENΔ434-435基因的扩增 | 第41页 |
| ·SENΔ434-435基因扩增产物的纯化 | 第41页 |
| ·SENΔ434-435基因片断的酶切及纯化 | 第41-42页 |
| ·酶切SENΔ434-435基因片段与pASK-IBA37载体的连接 | 第42页 |
| ·pASK-IBA37-SENA434-435重组质粒转化感受态E.coli BL21 | 第42页 |
| ·菌落PCR鉴定转化阳性的菌落 | 第42页 |
| ·KIV_(10)基因的克隆,酶切,连接和转化 | 第42页 |
| ·基因序列测定 | 第42-43页 |
| ·工程菌培养 | 第43页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第43页 |
| ·rKIV_(10)表达的Dot blot检测 | 第43-44页 |
| ·rSEN及rSENΔ434-435的纯化 | 第44页 |
| ·表达rKIV_(10)的纯化 | 第44-45页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第45页 |
| ·蛋白活性的测定 | 第45页 |
| ·rSEN与Lp(a)的相互作用 | 第45-48页 |
| ·rSEN与Lp(a)的结合 | 第45-47页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第45-46页 |
| ·亲和色谱层析(Pull down) | 第46-47页 |
| ·Lp(a)与rSEN结合机制的研究 | 第47-48页 |
| ·rSENΔ434-435与Plg/rKIV_(10)/Lp(a)的结合情况 | 第47页 |
| ·EACA抑制Plg/rKIV_(10)/Lp(a)与rSEN的结合(ELISA检测) | 第47页 |
| ·rKIV_(10)/Lp(a)抑制Plg与rSEN的结合实验 | 第47-48页 |
| ·M6血清型GAS与Lp(a)的相互作用 | 第48-53页 |
| ·M6血清型GAS培养时间的影响 | 第48页 |
| ·M6与Lp(a)的结合作用 | 第48页 |
| ·Lp(a)抑制Plg与M6的结合 | 第48-49页 |
| ·ELISA检测 | 第48-49页 |
| ·共孵育激活抑制实验 | 第49页 |
| ·M6与Lp(a)的结合机制研究 | 第49-53页 |
| ·EACA抑制Plg/Lp(a)与M6的结合 | 第49页 |
| ·M6与LDL的结合 | 第49页 |
| ·蛋白酶K消化处理对M6与Lp(a)结合的影响 | 第49页 |
| ·不同培养时间的M6的结合实验 | 第49-53页 |
| 4 结果 | 第53-77页 |
| ·pASK-IBA37-SEN及pASK-IBA37-SENΔ434-435表达载体的构建 | 第53-61页 |
| ·A群链球菌CMCC32175基因组的提取 | 第53页 |
| ·pASK-IBA37载体 | 第53-54页 |
| ·pASK-IBA37载体的酶切及纯化 | 第54页 |
| ·SEN基因的扩增 | 第54-55页 |
| ·重组质粒pASK-IBA37-SEN的构建 | 第55-56页 |
| ·SEN基因的酶切、连接和转化结果的鉴定 | 第56-58页 |
| ·SENΔ434-435基因的扩增 | 第58-59页 |
| ·SENΔ434-435基因的酶切、连接和转化结果的鉴定 | 第59页 |
| ·KIV_(10)基因扩增结果 | 第59-61页 |
| ·序列测定结果 | 第61页 |
| ·SEN序列测定结果 | 第61页 |
| ·SENΔ434-435序列测定结果 | 第61页 |
| ·KIV_(10)序列测定结果 | 第61页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化 | 第61-68页 |
| ·rSEN蛋白的表达 | 第61-62页 |
| ·rSEN蛋白的纯化 | 第62-64页 |
| ·rSENΔ434-435蛋白的表达 | 第64页 |
| ·rSENΔ434-435蛋白的纯化 | 第64-66页 |
| ·rSEN/rSENΔ434-435蛋白活性的测定结果 | 第66-67页 |
| ·rKIV_(10)蛋白的诱导表达 | 第67页 |
| ·rKIV_(10)蛋白的纯化 | 第67-68页 |
| ·rSEN/rSENΔ434-435与Lp(a)/Plg/rKIV_(10)的结合 | 第68-73页 |
| ·ELISA检测 | 第68-70页 |
| ·rSEN/rSENΔ434-435与Lp(a)结合的Pull down结果 | 第70-71页 |
| ·EACA抑制Plg/rKIV_(10)/Lp(a)与rSEN的结合 | 第71-72页 |
| ·Lp(a)/rKIV_(10)抑制rSEN与Plg的结合 | 第72-73页 |
| ·血清型M6的GAS与Plg/Lp(a)的相互作用 | 第73-77页 |
| ·M6与Plg/Lp(a)的结合 | 第73-74页 |
| ·Lp(a)抑制Pig与M6的结合 | 第74-75页 |
| ·ELISA检测 | 第74页 |
| ·共孵育激活抑制实验 | 第74-75页 |
| ·M6与Plg/Lp(a)的结合机制研究 | 第75-77页 |
| ·EACA抑制M6与Plg/Lp(a)的结合 | 第75-76页 |
| ·M6与LDL的结合 | 第76页 |
| ·蛋白酶K消化处理对M6与Plg/Lp(a)结合的影响 | 第76-77页 |
| ·不同培养时间的M6的结合实验 | 第77页 |
| 5 小结与讨论 | 第77-83页 |
| 6 结论 | 第83页 |
| 7 展望 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-96页 |
| 附录 | 第96-98页 |
| 作者简介 | 第98页 |
