| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-20页 |
| 一、哮喘的危害 | 第12页 |
| 二、哮喘病理机制 | 第12-14页 |
| 三、IL-33的生物学特点和功能 | 第14-15页 |
| 四、IL-33在哮喘病理中的可能角色 | 第15-18页 |
| 五、疾病的抗细胞因子干预 | 第18页 |
| 六、主动免疫策略 | 第18-19页 |
| 七、本论文研究思路、目的和意义 | 第19-20页 |
| 第一部分 呈现IL-33抗原的病毒样颗粒构建 | 第20-69页 |
| 一、引言 | 第20-21页 |
| 二、材料与方法 | 第21-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 疫苗 | 第21页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第21页 |
| 2.1.4 动物实验所需材料 | 第21页 |
| 2.1.5 实验所需抗体、试剂 | 第21-23页 |
| 2.1.6 所用的引物序列、设计的IL-33抗原肽序列 | 第23-24页 |
| 2.1.7 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-50页 |
| 2.2.1 基因克隆实验 | 第25-30页 |
| 2.2.2 IL-33抗原肽的选择以及重组构建于HBcAg载体 | 第30-32页 |
| 2.2.3 IL-33成熟全分子构建到HBcAg | 第32-36页 |
| 2.2.4 IL-33构建到HisABam质粒 | 第36-37页 |
| 2.2.5 蛋白表达、纯化和鉴定实验 | 第37-40页 |
| 2.2.6 诱导表达的HBcAg-33 Western Blot鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2.7 HBcAg-33菌体收集和超声波破碎 | 第41页 |
| 2.2.8 HBcAg-33硫酸铵纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.9 碘克沙醇密度梯度离心 | 第42-44页 |
| 2.2.10 透射电子显微镜观察HBcAg-33病毒样颗粒 | 第44页 |
| 2.2.11 Trex/IL-33表达和纯化 | 第44-45页 |
| 2.2.12 肠激酶酶切Trex/IL-33 | 第45页 |
| 2.2.13 BCA蛋白质定量 | 第45-46页 |
| 2.2.14 疫苗性质鉴定 | 第46-50页 |
| 三、结果与分析 | 第50-63页 |
| 3.1 IL-33抗原肽疫苗构建 | 第50-55页 |
| 3.1.1 IL-33氨基酸序列抗原性预测分析 | 第50-51页 |
| 3.1.2 IL-33氨基酸序列亲水性和疏水性预测 | 第51页 |
| 3.1.3 预测和设计的抗原肽序列 | 第51-53页 |
| 3.1.4 成功构建IL-33抗原肽重组质粒 | 第53页 |
| 3.1.5 IL-33抗原肽/HBcAg嵌合蛋白的诱导表达和纯化 | 第53-54页 |
| 3.1.6 透射电子显微镜观察 | 第54-55页 |
| 3.2 IL-33全分子疫苗构建 | 第55-56页 |
| 3.2.1 重组嵌合蛋白HBcAg-33高效表达与密度梯度离心纯化、鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2.2 重组嵌合蛋白HBcAg-33装配成病毒样颗粒 | 第56页 |
| 3.3 重组IL-33蛋白的表达与纯化 | 第56-57页 |
| 3.4 IL-33抗原肽免疫原性 | 第57-58页 |
| 3.5 HBcAg-33疫苗免疫特性 | 第58-63页 |
| 3.5.1 诱导表达的HBcAg-33的Western Blot鉴定 | 第58-59页 |
| 3.5.2 HBcAg-33疫苗与不同佐剂联合使用的免疫原性 | 第59页 |
| 3.5.3 HBcAg-33疫苗不同的免疫途径 | 第59-60页 |
| 3.5.4 HBcAg-33疫苗调控HBcAg特异的IgG_1和IgG_2 | 第60-61页 |
| 3.5.5 构建的各种形式的IL-33的生物学活性 | 第61-63页 |
| 四、讨论 | 第63-68页 |
| 4.1 抗细胞因子主动免疫策略在疾病模型病理机制研究及临床治疗中的应用潜能 | 第63页 |
| 4.2 抗原表位选择 | 第63-64页 |
| 4.3 病毒样颗粒疫苗 | 第64-65页 |
| 4.4 抗细胞因子主动免疫策略的安全性 | 第65页 |
| 4.5 基于IL-33抗原肽的VLPs的免疫原性 | 第65-66页 |
| 4.6 基于IL-33全分子VLPs的免疫学特性 | 第66-68页 |
| 五、小结 | 第68-69页 |
| 第二部分 呈现IL-33抗原的病毒样颗粒疫苗在急性哮喘模型中的干预研究 | 第69-87页 |
| 一、引言 | 第69-70页 |
| 二、材料和方法 | 第70-78页 |
| 2.1 实验材料 | 第70-71页 |
| 2.1.1 疫苗和细胞系 | 第70页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第70页 |
| 2.1.3 实验所需抗体、试剂和耗材 | 第70-71页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第71页 |
| 2.2 实验方法 | 第71-78页 |
| 2.2.1 急性哮喘模型干预实验 | 第71-72页 |
| 2.2.2 急性哮喘模型实验程序 | 第72页 |
| 2.2.3 样品采集 | 第72-74页 |
| 2.2.4 肺组织处理 | 第74-76页 |
| 2.2.5 半定量打分 | 第76页 |
| 2.2.6 RAW264.7细胞刺激实验 | 第76-78页 |
| 三、结果分析 | 第78-83页 |
| 3.1 外源给予IL-33引起小鼠气道炎性细胞浸润 | 第78页 |
| 3.2 基于IL-33抗原肽的病毒样颗粒疫苗在急性哮喘模型中的干预 | 第78-79页 |
| 3.2.1 IL-33抗原肽疫苗抑制急性哮喘模型BALF中的免疫细胞浸润 | 第78-79页 |
| 3.3 基于IL-33全分子的病毒样颗粒疫苗HBcAg33显著了抑制急性哮喘模型的气道炎症和粘液产生 | 第79-83页 |
| 3.3.1 HBcAg33疫苗抑制BALF总细胞数和IL-33水平 | 第79-80页 |
| 3.3.2 HBcAg33疫苗抑制肺部炎症 | 第80-81页 |
| 3.3.3 HBcAg33疫苗抑制粘液产生 | 第81-83页 |
| 四、讨论 | 第83-86页 |
| 4.1 基于肽以及基于全分子的IL-33疫苗特点与潜能 | 第83-84页 |
| 4.2 基于IL-33全分子的疫苗对肺组织炎症应答的影响 | 第84页 |
| 4.3 基于IL-33全分子的疫苗对气道上皮杯状细胞增生的影响 | 第84页 |
| 4.4 抗IL-33主动免疫对疾病治疗干预的应用潜能 | 第84-86页 |
| 五、小结 | 第86-87页 |
| 第三部分 呈现IL-33抗原的病毒样颗粒疫苗在慢性哮喘模型中的干预研究 | 第87-104页 |
| 一、引言 | 第87-88页 |
| 二、材料和方法 | 第88-93页 |
| 2.1 实验材料 | 第88-89页 |
| 2.1.1 疫苗 | 第88页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第88页 |
| 2.1.3 动物和细胞实验所需材料 | 第88页 |
| 2.1.4 细胞培养相关试剂 | 第88页 |
| 2.1.5 实验所需抗体、试剂和耗材 | 第88-89页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第89页 |
| 2.2 实验方法 | 第89-93页 |
| 2.2.1 慢性哮喘模型干预实验 | 第89-90页 |
| 2.2.2 慢性哮喘模型实验程序 | 第90页 |
| 2.2.3 样品采集 | 第90-92页 |
| 2.2.4 脾脏淋巴细胞分离采集和刺激 | 第92-93页 |
| 三、结果分析 | 第93-100页 |
| 3.1 OVA反复刺激成功建立了慢性哮喘模型 | 第93-94页 |
| 3.2 HBcAg-33疫苗在慢性哮喘小鼠中诱导产生IL-33特异的IgG抗体 | 第94页 |
| 3.3 HBcAg-33疫苗上调了OVA特异的IgG_(2a)水平 | 第94-95页 |
| 3.4 HBcAg-33疫苗显著抑制了血清过敏原OVA特异的IgE | 第95页 |
| 3.5 HBcAg-33疫苗显著抑制了BALF免疫细胞浸润 | 第95-96页 |
| 3.6 HBcAg-33疫苗促进脾淋巴细胞IFN-γ分泌 | 第96-97页 |
| 3.7 HBcAg-33疫苗免疫对肺组织炎症、气道杯状细胞增生、气道表皮下胶原积累无显著影响 | 第97-100页 |
| 3.7.1 H&E染色分析肺组织炎症 | 第97-98页 |
| 3.7.2 PAS染色 | 第98-99页 |
| 3.7.3 Masson trichrome染色 | 第99-100页 |
| 四、讨论 | 第100-103页 |
| 4.1 慢性模型研究中的抗体应答 | 第100-101页 |
| 4.2 慢性模型中疫苗免疫对细胞因子表达的影响 | 第101页 |
| 4.3 疫苗免疫对气道慢性炎性应答的影响 | 第101页 |
| 4.4 疫苗免疫对气道重塑的影响 | 第101-103页 |
| 五、小结 | 第103-104页 |
| 展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-110页 |
| 附录 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 个人简历 | 第114-117页 |
