摘要 | 第6-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
第一章 文献综述 | 第14-24页 |
1.1 乳脂的特点 | 第14页 |
1.2 山羊乳脂和奶牛的区别 | 第14-15页 |
1.3 山羊乳脂肪酸组成 | 第15-16页 |
1.4 长链脂肪酸的研究进展 | 第16-18页 |
1.4.1 饱和脂肪酸的研究进展 | 第16-18页 |
1.4.2 不饱和脂肪酸的研究进展 | 第18页 |
1.5 PPARG的研究进展 | 第18-20页 |
1.5.1 PPARG能够控制脂肪生成和脂代谢 | 第18-20页 |
1.5.2 PPARG能够调控脂代谢基因的网络通路 | 第20页 |
1.6 其它转录因子的研究进展 | 第20-22页 |
1.6.1 LXRA在脂质代谢中的作用 | 第20-21页 |
1.6.2 SREBF1在脂质代谢中的作用 | 第21-22页 |
1.7 ADIPOR1和LPL基因的研究进展 | 第22-23页 |
1.8 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
第二章 长链脂肪酸通过PPARG对脂代谢相关基因表达的影响 | 第24-41页 |
2.1 材料与方法 | 第24-31页 |
2.1.1 主要试剂 | 第24-25页 |
2.1.2 主要仪器 | 第25页 |
2.1.3 长链脂肪酸、ROSI和GW9662以及GG和T09的制备 | 第25页 |
2.1.4 细胞培养与处理 | 第25-26页 |
2.1.5 RNA提取和质量检测 | 第26-29页 |
2.1.6 cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
2.1.7 引物设计和RT-qPCR | 第30页 |
2.1.8 数据处理 | 第30-31页 |
2.2 结果 | 第31-38页 |
2.2.1 长链脂肪酸通过PPARG对脂肪酸代谢相关基因的mRNA表达影响 | 第31-35页 |
2.2.2 LXRA对脂肪酸代谢相关基因的影响 | 第35-38页 |
2.3 讨论 | 第38-40页 |
2.3.1 PPARG调控乳腺脂肪生成相关基因网络 | 第38-39页 |
2.3.2 长链脂肪酸通过PPARG调控乳腺脂肪生成相关基因 | 第39-40页 |
2.4 本章小结 | 第40-41页 |
第三章 PPARG在山羊乳腺上皮细胞中的过表达研究及其靶基因的筛选 | 第41-51页 |
3.1 材料与方法 | 第41-43页 |
3.1.1 主要试剂 | 第41页 |
3.1.2 主要仪器 | 第41-42页 |
3.1.3 重组腺病毒载体构建 | 第42页 |
3.1.4 超表达病毒Ad-PPARG包装、扩增 | 第42页 |
3.1.5 细胞培养与处理 | 第42页 |
3.1.6 RNA提取和质量检测 | 第42页 |
3.1.7 cDNA第一链的合成 | 第42页 |
3.1.8 引物设计和RT-qPCR | 第42-43页 |
3.1.9 数据处理 | 第43页 |
3.2 结果 | 第43-48页 |
3.2.1 超表达PPARG影响了脂肪酸合成,去饱和化,三酰甘油合成以及脂滴形成相关基因的mRNA表达 | 第43-46页 |
3.2.2 超表达PPARG影响了生物钟相关基因的mRNA表达 | 第46-47页 |
3.2.3 超表达PPARG影响了转录调控相关基因的mRNA表达 | 第47-48页 |
3.3 讨论 | 第48-50页 |
3.3.1 超表达PPARG影响了脂肪酸合成,去饱和化,三酰甘油合成以及脂滴形成相关基因的mRNA表达 | 第48页 |
3.3.2 超表达PPARG对生物钟相关基因mRNA表达的影响 | 第48-49页 |
3.3.3 超表达PPARG对转录调控相关基因mRNA表达的影响 | 第49页 |
3.3.4 PPARG的下游靶基因AdipoR1和LPL的确定 | 第49-50页 |
3.4 本章小结 | 第50-51页 |
第四章 ADIPOR1在乳腺上皮细胞上的表达调控研究 | 第51-61页 |
4.1 材料和方法 | 第51-54页 |
4.1.1 实验样品 | 第51页 |
4.1.2 主要试剂 | 第51-52页 |
4.1.3 引物设计 | 第52页 |
4.1.4 总RNA提取,cDNA合成以及实时定量 | 第52页 |
4.1.5 AdipoR1基因cDNA全长的克隆 | 第52页 |
4.1.6 AdipoR1的生物信息学分析 | 第52-53页 |
4.1.7 细胞的处理及siRNA的设计 | 第53页 |
4.1.8 AdipoR1在各组织中的表达量 | 第53-54页 |
4.1.9 数据处理与分析 | 第54页 |
4.2 结果 | 第54-58页 |
4.2.1 山羊AdipoR1基因序列全长的克隆 | 第54-55页 |
4.2.2 山羊AdipoR1的同源性分析 | 第55页 |
4.2.3 山羊AdipoR1的结构分析 | 第55-56页 |
4.2.4 AdipoR1在不同组织和泌乳时期的表达分析 | 第56页 |
4.2.5 奶山羊乳腺上皮细胞中添加胰岛素和催乳素对AdipoR1表达的影响 | 第56-57页 |
4.2.6 AdipoR1干扰后对奶山羊乳腺上皮细胞脂肪酸代谢基因的影响 | 第57-58页 |
4.3 讨论 | 第58-60页 |
4.3.1 AdipoR1基因在不同组织和泌乳时期的表达 | 第58-59页 |
4.3.2 胰岛素和催乳素对AdipoR1基因的调控 | 第59页 |
4.3.3 AdipoR1干扰对脂肪酸代谢相关基因表达的影响 | 第59-60页 |
4.4 本章小结 | 第60-61页 |
第五章 LPL的组织表达及在山羊乳腺上皮细胞中对脂肪酸合成相关基因的影响 | 第61-70页 |
5.1 材料和方法 | 第61-64页 |
5.1.1 实验动物和样品采集 | 第61页 |
5.1.2 主要试剂 | 第61-62页 |
5.1.3 LPL基因的克隆,序列分析和组织表达 | 第62-63页 |
5.1.4 表达和统计分析 | 第63页 |
5.1.5 Orlistat和LPL干扰在山羊乳腺上皮细胞中对乳脂合成相关基因的影响 | 第63-64页 |
5.2 结果 | 第64-68页 |
5.2.1 LPL的克隆和序列分析 | 第64-65页 |
5.2.2 LPL蛋白系统进化树的构建 | 第65页 |
5.2.3 LPL基因在10个组织和两个泌乳阶段的mRNA表达 | 第65-67页 |
5.2.4 LPL干扰和Orlistat处理在山羊乳腺上皮细胞中影响了乳脂合成相关基因的表达 | 第67-68页 |
5.3 讨论 | 第68-69页 |
5.3.1 LPL基因在10个不同组织和两个不同泌乳时期的表达 | 第68页 |
5.3.2 在山羊乳腺上皮细胞中干扰LPL基因和添加Orlistat对乳脂合成相关基因的影响 | 第68-69页 |
5.4 本章小结 | 第69-70页 |
结论 | 第70-71页 |
本研究的创新点 | 第71-72页 |
存在问题及展望 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-82页 |
附录 | 第82-90页 |
缩略词表 | 第90-94页 |
致谢 | 第94-96页 |
作者简介 | 第96页 |