| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 香草醛概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 香草醛简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 香草醛的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.3 香草醛的市场概述 | 第14页 |
| 1.2 香草醛的生产概述 | 第14-21页 |
| 1.2.1 化学法合成香草醛 | 第14-17页 |
| 1.2.2 植物细胞培养法 | 第17-18页 |
| 1.2.3 微生物转化法与相关酶基因的研究 | 第18-21页 |
| 1.3 基于内含肽的蛋白质纯化方法 | 第21-23页 |
| 1.4 酶的固定化研究 | 第23-24页 |
| 1.5 本论文的研究意义和主要研究内容 | 第24-25页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第24页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第24-25页 |
| 第2章 异丁香酚单加氧酶重组质粒的构建以及酶动力学研究 | 第25-42页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料与仪器设备 | 第26-30页 |
| 2.2.1 实验菌株、载体以及工具酶 | 第26-27页 |
| 2.2.2 实验试剂和药品 | 第27-28页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.4 微生物培养基及常用缓冲溶液配制 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-37页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第30页 |
| 2.3.2 用于扩增的PCR引物设计和PCR反应体系及程序 | 第30-31页 |
| 2.3.3 质粒提取实验方法 | 第31-32页 |
| 2.3.4 目的基因IEM片段的纯化 | 第32页 |
| 2.3.5 目的基因IEM和质粒的双酶切 | 第32页 |
| 2.3.6 回收酶切产物 | 第32-33页 |
| 2.3.7 酶切后目的基因与质粒p ET(30a)-Mxe-ELK16连接 | 第33页 |
| 2.3.8 制备E.coli Top10感受态细胞 | 第33-34页 |
| 2.3.9 质粒导入感受态细胞 | 第34页 |
| 2.3.10 重组质粒的验证 | 第34-35页 |
| 2.3.11 诱导表达阳性克隆蛋白 | 第35-36页 |
| 2.3.12 酶动力学分析 | 第36-37页 |
| 2.4 结果分析 | 第37-41页 |
| 2.4.1 IEM基因扩增和pET(30a)-IEM-Mxe-ELK16重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| 2.4.2 重组质粒的验证 | 第38-39页 |
| 2.4.3 诱导pET(30a)-IEM-Mxe-ELK16表达蛋白及SDS-PAGE电泳结果分析 | 第39页 |
| 2.4.4 酶动力学分析 | 第39-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 异丁香酚单加氧酶重组蛋白自切割体系的初步表征及优化 | 第42-51页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验试剂与仪器 | 第42-44页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第42页 |
| 3.2.2 实验试剂与药品 | 第42-43页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第43-44页 |
| 3.2.4 常用溶液配制 | 第44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-46页 |
| 3.3.1 重组菌株在大肠杆菌中的表达 | 第44-45页 |
| 3.3.2 细胞破碎与蛋白的提取 | 第45页 |
| 3.3.3 Mxe内含肽介导的自切割初步验证 | 第45页 |
| 3.3.4 Mxe内含肽介导自切割的条件优化 | 第45-46页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第46-50页 |
| 3.4.1 Mxe内含肽介导的自切割初步验证 | 第46-47页 |
| 3.4.2 Mxe内含肽介导自切割的条件优化 | 第47-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第4章 异丁香酚单加氧酶融合蛋白初步固定化研究 | 第51-64页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验试剂与仪器 | 第51-53页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第51页 |
| 4.2.2 实验试剂与药品 | 第51-52页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第52-53页 |
| 4.2.4 常用溶液配制 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-56页 |
| 4.3.1 重组菌株在大肠杆菌中的表达 | 第53-54页 |
| 4.3.2 固定化实验方法 | 第54页 |
| 4.3.3 转化方法与样品处理 | 第54页 |
| 4.3.4 固定化酶的制备条件优化 | 第54-55页 |
| 4.3.5 固定化酶稳定性的研究 | 第55页 |
| 4.3.6 固定化酶的转化条件优化 | 第55-56页 |
| 4.3.7 标准曲线测定 | 第56页 |
| 4.3.8 HPLC检测方法 | 第56页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第56-63页 |
| 4.4.1 香草醛与异丁香酚标准样品的HPLC测定 | 第56-57页 |
| 4.4.2 香草醛标准曲线的测定 | 第57-58页 |
| 4.4.3 固定化酶的制备条件优化结果 | 第58-59页 |
| 4.4.4 固定化酶稳定性的研究 | 第59-60页 |
| 4.4.5 固定化酶转化条件优化 | 第60-62页 |
| 4.4.6 扫描电镜分析 | 第62-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 第5章 异丁香酚单加氧酶融合蛋白培养条件优化 | 第64-74页 |
| 5.1 引言 | 第64页 |
| 5.2 实验试剂与仪器设备 | 第64-66页 |
| 5.2.1 实验菌株 | 第64页 |
| 5.2.2 实验试剂与药品 | 第64-65页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第65页 |
| 5.2.4 常用溶液配制 | 第65-66页 |
| 5.3 实验方法 | 第66-68页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第66页 |
| 5.3.2 酶诱导条件优化 | 第66-67页 |
| 5.3.3 酶反应条件优化 | 第67-68页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第68-72页 |
| 5.4.1 酶诱导条件优化 | 第68-69页 |
| 5.4.2 酶反应条件优化 | 第69-72页 |
| 5.5 本章小结 | 第72-74页 |
| 第6章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 6.1 结论 | 第74页 |
| 6.2 课题展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第85页 |
