| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写对照表 | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第14-18页 |
| 引言 | 第18-20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-43页 |
| 1.1 材料 | 第20-25页 |
| 1.1.1 虫株 | 第20-21页 |
| 1.1.2 试验动物 | 第21页 |
| 1.1.3 质粒、菌株和虫株 | 第21页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.1.5 主要试剂 | 第22页 |
| 1.1.6 主要溶液 | 第22-24页 |
| 1.1.7 培养基 | 第24页 |
| 1.1.8 引物 | 第24-25页 |
| 1.2 方法 | 第25-31页 |
| 1.2.1 虫体样品处理 | 第25页 |
| 1.2.2 虫体基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 1.2.3 MIC5和MIC16基因的PCR | 第26-27页 |
| 1.2.4 琼脂糖电泳分析 | 第27页 |
| 1.2.5 PCR产物的回收与纯化 | 第27-28页 |
| 1.2.6 PCR产物的连接 | 第28页 |
| 1.2.7 感受态细胞（JM109）的制备 | 第28-29页 |
| 1.2.8 重组质粒pMD18-MIC5和pMD18-MIC16的转化 | 第29页 |
| 1.2.9 pMD18-MIC5和pMD18-MIC16重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 1.2.10 MIC5和MIC16的序列测定 | 第30页 |
| 1.2.11 MIC16基因的PCR-RFLP分析 | 第30页 |
| 1.2.12 MIC5基因和MIC16基因的序列分析 | 第30-31页 |
| 1.3 MIC5和MIC16 DNA疫苗免疫保护性研究 | 第31-38页 |
| 1.3.1 总RNA的提取 | 第31页 |
| 1.3.2 RT-PCR扩增目的片段 | 第31-32页 |
| 1.3.3 PCR扩增 | 第32-33页 |
| 1.3.4 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第33页 |
| 1.3.5 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第33页 |
| 1.3.6 PCR产物的连接 | 第33页 |
| 1.3.7 感受态细胞（JM109）的制备 | 第33页 |
| 1.3.8 重组质粒pMD18-MIC5和pMD18-MIC16的转化 | 第33页 |
| 1.3.9 pMD18-MIC5和pMD18-MIC16重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第33-35页 |
| 1.3.10 pMD18-MIC5、pMD18-MIC16重组质粒和pVAX I质粒的小量提取 | 第35页 |
| 1.3.11 pMD18-MIC5和pMD18-MIC16重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 1.3.12 pMD18-MIC5和pMD18-MIC16的序列测定 | 第36页 |
| 1.3.14 pVAX I载体与MIC5和MIC16目的片段的连接 | 第36页 |
| 1.3.15 感受态细胞（DH5α）的制备 | 第36页 |
| 1.3.16 连接产物的转化与鉴定 | 第36-37页 |
| 1.3.17 目的片段的序列测定 | 第37页 |
| 1.3.18 大量制备质粒与质粒纯化 | 第37-38页 |
| 1.3.19 质粒DNA的纯度检测 | 第38页 |
| 1.4 重组质粒的免疫效果评价 | 第38-43页 |
| 1.4.1 雌性的KM鼠的分组与免疫 | 第38-39页 |
| 1.4.2 免疫方式 | 第39页 |
| 1.4.3 小鼠血清的制备 | 第39页 |
| 1.4.4 血清中IgG抗体及IgG1、IgG2a抗体亚类的检测 | 第39-40页 |
| 1.4.5 免疫鼠脾细胞悬液的制备（超净工作台中进行） | 第40-41页 |
| 1.4.6 细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12p70、IL-23 的检测 | 第41-42页 |
| 1.4.7 免疫鼠脾淋巴细胞增殖实验（MTT法） | 第42页 |
| 1.4.8 CD3+CD4+CD8-和CD3+CD8+CD4-细胞的流式细胞分选仪分析 | 第42-43页 |
| 1.4.9 弓形虫RH株腹腔注射感染昆明鼠 | 第43页 |
| 1.4.10 弓形虫PRU脑包囊攻击感染昆明鼠 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-56页 |
| 2.1 弓形虫MIC5基因和MIC16基因的PCR扩增结果 | 第43-44页 |
| 2.2 重组质粒pMD18-MIC5和pMD18-MIC16的菌液PCR结果 | 第44-45页 |
| 2.3 弓形虫MIC16基因克隆子的PCR-RFLP分析结果 | 第45-46页 |
| 2.4 MIC5和MIC16基因序列的遗传变异分析 | 第46-48页 |
| 2.4.1 不同弓形虫虫株的MIC5基因序列的变异情况 | 第46-47页 |
| 2.4.2 不同弓形虫虫株的MIC16基因序列的变异情况 | 第47页 |
| 2.4.3 MIC5基因和MIC16基因系统发育树的构建 | 第47-48页 |
| 2.5 弓形虫RH株pVAX-MIC5和pVAX-MIC16疫苗的制备 | 第48-51页 |
| 2.5.1 弓形虫RH株的MIC5、MIC16基因的RT-PCR扩增结果 | 第48页 |
| 2.5.2 pMD18-MIC5和pMD18-MIC16重组质粒的菌液PCR扩增结果 | 第48-49页 |
| 2.5.3 pMD18-MIC5和pMD18-MIC16重组质粒的酶切鉴定 | 第49-50页 |
| 2.5.4 pVAX -MIC5和pVAX -MIC16重组质粒的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| 2.6 抗体和细胞因子的检测 | 第51-53页 |
| 2.6.1 免疫前后实验鼠血清中IgG抗体水平的变化 | 第51-52页 |
| 2.6.2 实验鼠血清中IgG1、IgG2a抗体亚类水平的变化 | 第52页 |
| 2.6.3 免疫鼠血清IFN-γ 检测结果 | 第52-53页 |
| 2.6.4 免疫鼠血清IL-2 检测结果 | 第53页 |
| 2.6.5 免疫鼠血清IL-4 和IL-10 检测结果 | 第53页 |
| 2.6.6 免疫鼠血清IL-12p70和IL-23 检测结果 | 第53页 |
| 2.7 MTT及流式细胞检测结果 | 第53-54页 |
| 2.8 实验鼠腹腔注射感染弓形虫RH株的效果评价 | 第54-55页 |
| 2.9 实验鼠感染PRU株的脑包囊计数结果 | 第55-56页 |
| 3.讨论 | 第56-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
