| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第11-16页 |
| 1.1 宫颈癌概述 | 第11-12页 |
| 1.2 PLOD2基因概述 | 第12页 |
| 1.3 PLOD2与恶性肿瘤的关系 | 第12-14页 |
| 1.4 缺氧、TGF-β1与肿瘤侵袭转移的关系以及对PLOD2的诱导作用 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-40页 |
| 2.1 细胞培养 | 第16-20页 |
| 2.1.1 细胞来源 | 第16页 |
| 2.1.2 细胞培养试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 细胞培养耗材 | 第16-17页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第17页 |
| 2.1.5 细胞培养试剂的配制 | 第17页 |
| 2.1.6 细胞复苏、培养及换液 | 第17-18页 |
| 2.1.7 细胞传代 | 第18页 |
| 2.1.8 细胞冻存 | 第18-19页 |
| 2.1.9 细胞计数及施加干预 | 第19-20页 |
| 2.2 瞬时转染靶向PLOD2基因的siRNA | 第20-21页 |
| 2.2.1 相关试剂及耗材 | 第20页 |
| 2.2.2 细胞瞬时转染 | 第20-21页 |
| 2.3 细胞功能实验 | 第21-23页 |
| 2.3.1 相关试剂及耗材 | 第21页 |
| 2.3.2 划痕实验 | 第21-22页 |
| 2.3.3 迁移实验 | 第22页 |
| 2.3.4 基质胶侵袭实验 | 第22-23页 |
| 2.3.5 黏附实验 | 第23页 |
| 2.4 蛋白质印迹法(Western Blot) | 第23-31页 |
| 2.4.1 Western Blot相关试剂 | 第23-24页 |
| 2.4.2 抗体 | 第24-25页 |
| 2.4.3 仪器设备及耗材 | 第25页 |
| 2.4.4 Western Blotting相关试剂配制 | 第25-26页 |
| 2.4.5 细胞全蛋白的提取 | 第26-28页 |
| 2.4.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28-31页 |
| 2.5 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第31-35页 |
| 2.5.1 qRT-PCR相关试剂 | 第31-32页 |
| 2.5.2 qRT-PCR相关实验仪器设备及耗材 | 第32页 |
| 2.5.3 基因和引物信息 | 第32-33页 |
| 2.5.4 细胞总RNA样本的提取及浓度测定 | 第33页 |
| 2.5.5 RNA逆转录为cDNA | 第33-34页 |
| 2.5.6 实时荧光定量PCR | 第34-35页 |
| 2.6 免疫荧光 | 第35-36页 |
| 2.6.1 相关试剂 | 第35页 |
| 2.6.2 抗体 | 第35页 |
| 2.6.3 相关耗材及仪器 | 第35-36页 |
| 2.6.4 实验步骤 | 第36页 |
| 2.7 PLOD2沉默的慢病毒稳定转染细胞株构建 | 第36-38页 |
| 2.7.1 相关试剂及耗材 | 第36-37页 |
| 2.7.2 HeLa细胞感染预实验 | 第37页 |
| 2.7.3 正式的病毒感染实验 | 第37-38页 |
| 2.8 裸鼠尾静脉转移实验 | 第38-40页 |
| 2.8.1 相关试剂、耗材 | 第38页 |
| 2.8.2 相关设备 | 第38-39页 |
| 2.8.3 荧光素酶实验 | 第39页 |
| 2.8.4 稳定转染细胞株的尾静脉注射 | 第39页 |
| 2.8.5 小动物活体成像 | 第39-40页 |
| 2.9 统计分析 | 第40页 |
| 第三章 结果 | 第40-65页 |
| 3.1 靶向沉默PLOD2基因抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力 | 第40-44页 |
| 3.1.1 siRNA转染沉默PLOD2的效率检测 | 第40-41页 |
| 3.1.2 靶向沉默PLOD2基因抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭能力 | 第41-44页 |
| 3.2 米诺地尔抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力 | 第44-47页 |
| 3.2.1 米诺地尔抑制PLOD2基因表达 | 第44-45页 |
| 3.2.2 米诺地尔抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力 | 第45-47页 |
| 3.3 抑制PLOD2表达可逆转缺氧诱导的细胞迁移侵袭能力的增强 | 第47-52页 |
| 3.3.1 氯化钴刺激模拟缺氧可诱导PLOD2表达 | 第47-48页 |
| 3.3.2 抑制PLOD2表达可逆转缺氧诱导的细胞迁移侵袭能力的增强 | 第48-51页 |
| 3.3.3 PLOD2基因对基质金属蛋白酶MMP2和MMP9表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.4 靶向沉默PLOD2基因抑制宫颈癌细胞的上皮间质转化 | 第52-55页 |
| 3.4.1 靶向沉默PLOD2对宫颈癌细胞形态的影响 | 第52-54页 |
| 3.4.2 沉默或抑制PLOD2基因对上皮间质转化相关分子标志物表达的影响 | 第54-55页 |
| 3.5 PLOD2参与调节TGF-β1诱导的上皮间质转化 | 第55-59页 |
| 3.5.1 TGF-β1刺激可诱导宫颈癌细胞PLOD2表达 | 第55-56页 |
| 3.5.2 靶向沉默PLOD2联合TGF-β1刺激对上皮间质转化相关分子标志物表达的影响 | 第56-57页 |
| 3.5.3 靶向沉默PLOD2表达抑制TGF-β1诱导的β-catenin核转位 | 第57-58页 |
| 3.5.4 靶向沉默PLOD2表达可抑制AKT的磷酸化 | 第58-59页 |
| 3.6 靶向沉默PLOD2抑制宫颈癌细胞的黏附能力 | 第59-62页 |
| 3.6.1 靶向沉默PLOD2抑制宫颈癌细胞对Ⅰ型胶原蛋白的黏附 | 第59-60页 |
| 3.6.2 靶向沉默PLOD2抑制宫颈癌细胞黏着斑的形成 | 第60-62页 |
| 3.7 PLOD2在宫颈癌患者中高表达 | 第62-63页 |
| 3.8 慢病毒转染稳定沉默PLOD2表达抑制裸鼠转移瘤的形成 | 第63-65页 |
| 3.8.1 活体成像 | 第63-64页 |
| 3.8.2 大体图像 | 第64-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-68页 |
| 全文小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 攻读硕士学位期间成果 | 第74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
