| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 酞酸酯概述 | 第12-13页 |
| 1.2 酞酸酯的国内外研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 酞酸酯对动物的毒性效应 | 第13-14页 |
| 1.2.2 酞酸酯对植物的毒性效应 | 第14页 |
| 1.2.3 酞酸酯对土壤微生物的生态毒性 | 第14-16页 |
| 1.3 典型酞酸酯DEHP概述 | 第16页 |
| 1.4 土壤微生物群落结构研究方法 | 第16-21页 |
| 1.4.1 传统微生物平板培养法 | 第17页 |
| 1.4.2 生化方法 | 第17-18页 |
| 1.4.3 分子生物技术 | 第18-20页 |
| 1.4.4 生物信息学技术 | 第20-21页 |
| 1.5 小结 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| 2.1 药品试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.1 典型酞酸酯DEHP | 第23页 |
| 2.1.2 土壤材料及其染毒方法 | 第23-24页 |
| 2.1.3 其他药品试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 仪器设备 | 第25页 |
| 2.3 平板计数 | 第25-26页 |
| 2.3.1 土壤稀释液的制备 | 第25页 |
| 2.3.2 细菌的计数 | 第25页 |
| 2.3.3 真菌的计数 | 第25-26页 |
| 2.3.4 放线菌的计数 | 第26页 |
| 2.3.5 土壤含菌量的计算 | 第26页 |
| 2.3.6 数据处理 | 第26页 |
| 2.4 微生物功能多样性测定 | 第26-27页 |
| 2.4.1 土壤稀释液的制备 | 第26页 |
| 2.4.2 ELISA反应 | 第26-27页 |
| 2.4.3 数据处理 | 第27页 |
| 2.5 末端限制性片段长度多样性 | 第27-30页 |
| 2.5.1 土壤总DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.5.2 细菌16sRNA片段的PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.5.3 16s片段的酶切 | 第29页 |
| 2.5.4 T-RFLP检测及数据分析 | 第29-30页 |
| 2.6 变性梯度凝胶电泳（DGGE） | 第30-34页 |
| 2.6.1 土壤总DNA的提取 | 第30页 |
| 2.6.2 细菌16sRNA片段的PCR扩增 | 第30页 |
| 2.6.3 细菌16sRNA V3区的PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.6.4 变性梯度凝胶电泳 | 第31-32页 |
| 2.6.5 切胶回收及重新PCR扩增 | 第32页 |
| 2.6.6 连接转化 | 第32-33页 |
| 2.6.7 阳性鉴定与测序 | 第33-34页 |
| 2.6.8 数据处理 | 第34页 |
| 2.7 构建克隆文库 | 第34-37页 |
| 2.7.1 土壤总DNA的提取 | 第34页 |
| 2.7.2 细菌16sRNA片段的PCR扩增 | 第34页 |
| 2.7.3 PCR产物的连接转化 | 第34页 |
| 2.7.4 阳性克隆的筛选 | 第34-35页 |
| 2.7.5 ARDRA分型 | 第35页 |
| 2.7.6 序列分析 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-67页 |
| 3.1 DEHP对土壤微生物数量的影响 | 第37-40页 |
| 3.1.1 DEHP对细菌数量的影响 | 第37-38页 |
| 3.1.2 DEHP对真菌数量的影响 | 第38-39页 |
| 3.1.3 DEHP对放线菌数量的影响 | 第39页 |
| 3.1.4 小结 | 第39-40页 |
| 3.2 DEHP对微生物功能多样性的影响 | 第40-47页 |
| 3.2.1 土壤中微生物总体活性的变化 | 第40-41页 |
| 3.2.2 土壤微生物功能多样性差异 | 第41-45页 |
| 3.2.3 土壤微生物碳源利用强度变化 | 第45-46页 |
| 3.2.4 主成分变化 | 第46-47页 |
| 3.2.5 小结 | 第47页 |
| 3.3 DEHP对土壤微生物群落的T-RFLP指纹分析 | 第47-54页 |
| 3.3.1 T-RFLP的图谱处理 | 第47-48页 |
| 3.3.2 DEHP对土壤中微生物群落相对丰度变化影响 | 第48-50页 |
| 3.3.3 DEHP对土壤中微生物多样性指数的影响 | 第50-52页 |
| 3.3.4 T-RFLP图谱主要片段的定性分析 | 第52-53页 |
| 3.3.5 主成分变化 | 第53-54页 |
| 3.3.6 小结 | 第54页 |
| 3.4 变性梯度凝胶电泳 | 第54-57页 |
| 3.4.1 DGGE电泳结果 | 第54页 |
| 3.4.2 DGGE切胶条带分析 | 第54-57页 |
| 3.5 构建克隆文库 | 第57-67页 |
| 3.5.1 16S rRNA文库的覆盖率 | 第57-58页 |
| 3.5.2 16S rRNA文库的构建 | 第58-67页 |
| 4 讨论 | 第67-71页 |
| 4.1 DEHP对土壤微生物数量的影响 | 第67页 |
| 4.2 DEHP对土壤微生物功能多样性的影响 | 第67-68页 |
| 4.3 DEHP对土壤微生物遗传多样性的影响 | 第68-69页 |
| 4.4 DEHP对土壤微生物结构多样性的影响 | 第69-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 6 本论文创新及有待改进之处 | 第72-73页 |
| 7 参考文献 | 第73-81页 |
| 8 致谢 | 第81-82页 |
| 9 攻读学位期间发表论文 | 第82页 |
