| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-27页 |
| 1.1 表观遗传学 | 第15页 |
| 1.1.1 表观遗传学概述 | 第15页 |
| 1.1.2 表观遗传学研究内容 | 第15页 |
| 1.2 microRNA概述 | 第15-16页 |
| 1.3 miRNA检测技术 | 第16-21页 |
| 1.3.1 Northern杂交印迹法 | 第17-18页 |
| 1.3.2 芯片微阵列(microarray)法 | 第18-20页 |
| 1.3.3 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法 | 第20-21页 |
| 1.4 电化学生物传感器 | 第21页 |
| 1.5 光电化学传感器 | 第21-24页 |
| 1.6 本课题的提出以及主要研究内容 | 第24-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-41页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第27-31页 |
| 2.1.1 仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.2 试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.3 实验中主要缓冲溶液的配置 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-41页 |
| 2.2.1 基于DSN酶的光电化学生物传感器检测miRNA-21 | 第31-34页 |
| 2.2.1.1 Au纳米粒子的制备 | 第31页 |
| 2.2.1.2 硫化铋的制备及表征 | 第31页 |
| 2.2.1.3 硫化铋纳米金复合物的制备及表征 | 第31页 |
| 2.2.1.4 ITO电极预处理 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 生物传感器的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.1.6 光电化学信号检测 | 第33页 |
| 2.2.1.7 miRNA-21 生物传感器校正曲线的测定 | 第33页 |
| 2.2.1.8 miRNA-21 生物传感器的选择性 | 第33-34页 |
| 2.2.1.9 感染禽白血病的鸡细胞中miRNA-21 表达量的检测 | 第34页 |
| 2.2.2 基于T7核酸外切酶双重等温循环扩增法检测人血清中miRNA-21 | 第34-37页 |
| 2.2.2.1 金电极预处理 | 第34页 |
| 2.2.2.2 电沉积纳米金 | 第34-35页 |
| 2.2.2.3 连接反应 | 第35页 |
| 2.2.2.4 T7核酸外切酶第一重等温循环酶切反应 | 第35页 |
| 2.2.2.5 T7核酸外切酶第二重等温循环酶切反应 | 第35页 |
| 2.2.2.6 固定信号分子DNA S3 | 第35页 |
| 2.2.2.7 电化学信号检测 | 第35页 |
| 2.2.2.8 miRNA生物传感器校正曲线的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.2.9 miRNA生物传感器选择性的检测 | 第36页 |
| 2.2.2.10 提取胃癌患者血清中总RNA | 第36页 |
| 2.2.2.11 电化学检测胃癌患者血清中microRNA-21 含量 | 第36-37页 |
| 2.2.3 基于CuO-CuWO_4和滚环扩增的光电化学生物传感器检测水稻叶片中miRNA-319a | 第37-41页 |
| 2.2.3.1 光电材料氧化铜和钨酸铜复合材料(CuO-CuWO_4)的制备 | 第37页 |
| 2.2.3.2 ITO电极的预处理 | 第37页 |
| 2.2.3.3 CuO-CuWO_4的固定 | 第37-38页 |
| 2.2.3.4 金电极的预处理 | 第38页 |
| 2.2.3.5 纳米金修饰电极(AuNPs/Au)的制备 | 第38页 |
| 2.2.3.6 探针DNA的固定 | 第38页 |
| 2.2.3.7 连接反应和滚环扩增反应 | 第38-39页 |
| 2.2.3.8 杂交反应 | 第39页 |
| 2.2.3.9 Phos-tag-Biotin的固定反应 | 第39页 |
| 2.2.3.10 Avidin-ALP的固定反应 | 第39页 |
| 2.2.3.11 光电化学信号检测 | 第39-40页 |
| 2.2.3.12 特异性检测 | 第40页 |
| 2.2.3.13 水稻叶片中miRNA-319a含量检测 | 第40-41页 |
| 3. 结果与分析 | 第41-62页 |
| 3.1 基于DSN酶的光电化学生物传感器检测miRNA-211 | 第41-49页 |
| 3.1.1 硫化铋及硫化铋纳米金复合物的表征 | 第41-42页 |
| 3.1.2 不同修饰电极的光电化学表征 | 第42-45页 |
| 3.1.3 条件优化 | 第45-46页 |
| 3.1.4 校正曲线和线性范围 | 第46-47页 |
| 3.1.5 传感器的选择性 | 第47-48页 |
| 3.1.6 禽白血病病变组织细胞中MiRNA-21 表达量的检测 | 第48-49页 |
| 3.2 基于T7核酸外切酶双重等温循环扩增法检测人血清中miRNA-21 | 第49-55页 |
| 3.2.1 实验可行性分析 | 第49-50页 |
| 3.2.2 条件优化 | 第50-52页 |
| 3.2.3 标准曲线的测定 | 第52-53页 |
| 3.2.4 传感器的重复性和选择性 | 第53-54页 |
| 3.2.5 正常人与胃癌患者血清中miRNA-21 表达量的测定 | 第54-55页 |
| 3.3 基于CuO-CuWO_4和滚环扩增的光电化学生物传感器检测水稻叶片中miRNA-319a | 第55-62页 |
| 3.3.1 硫化铋的表征 | 第55-57页 |
| 3.3.2 实验可行性分析 | 第57-58页 |
| 3.3.3 标准曲线的绘制和传感器选择性研究 | 第58-60页 |
| 3.3.4 传感器的选择性研究 | 第60-61页 |
| 3.3.5 水稻幼苗叶片中miRNA-319a相对表达量的检测 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-66页 |
| 4.1 基于DSN酶的光电化学生物传感器检测miRNA-21 | 第62-63页 |
| 4.2 基于T7核酸外切酶双重等温循环扩增法检测人血清中miRNA-21 | 第63-64页 |
| 4.3 基于CuO-CuWO_4和滚环扩增的光电化学生物传感器检测水稻叶片中miRNA-319a | 第64-66页 |
| 5. 结论 | 第66-67页 |
| 5.1 基于DSN酶的光电化学生物传感器检测miRNA-21 | 第66页 |
| 5.2 基于T7核酸外切酶双重等温循环扩增法检测人血清中miRNA-21 | 第66页 |
| 5.3 基于CuO-CuWO_4和滚环扩增的光电化学生物传感器检测水稻叶片中miRNA-319a | 第66-67页 |
| 6 创新之处 | 第67-68页 |
| 7 参考文献 | 第68-87页 |
| 8 致谢 | 第87-88页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第88-89页 |
