| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| ·引言 | 第13-14页 |
| ·转录因子 | 第14-21页 |
| ·转录因子结构特点 | 第15-16页 |
| ·全局转录因子FNR | 第16-19页 |
| ·其它全局转录因子 | 第19-20页 |
| ·全局转录机制工程 | 第20-21页 |
| ·定向进化策略 | 第21-25页 |
| ·构建基因突变库方法 | 第22-24页 |
| ·突变文库筛选方法 | 第24-25页 |
| ·蛋白定向进化应用 | 第25-26页 |
| ·本研究的基本思路及拟研究内容 | 第26-27页 |
| ·参考文献 | 第27-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-39页 |
| ·实验材料 | 第33-35页 |
| ·质粒和菌株 | 第33页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第33-34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第35页 |
| ·琼脂糖凝胶核酸电泳和切胶回收DNA | 第35-36页 |
| ·质粒的提取 | 第36-37页 |
| ·化学转化感受态细胞的制备及转化 | 第37页 |
| ·电转化感受态细胞的制备及电转化 | 第37页 |
| ·细菌细胞密度的测定 | 第37-38页 |
| ·参考文献 | 第38-39页 |
| 第三章 重组质粒pUC18-fnr operon和pSK-fnr operon的构建 | 第39-51页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·材料与方法 | 第40-43页 |
| ·菌株与质粒 | 第40页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第40页 |
| ·培养基和培养条件 | 第40页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第40页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第40页 |
| ·连接反应液的浓缩回收 | 第40-41页 |
| ·目的基因PCR扩增及双酶切反应 | 第41页 |
| ·重组质粒pUC18-fnr operon的构建 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pSK-fnr operon的构建 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-50页 |
| ·大肠杆菌基因组的提取 | 第43页 |
| ·基因fnrTF和强终止子rrnB的扩增 | 第43-44页 |
| ·基因fnr的扩增 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pUC18-fnr operon的构建 | 第45-47页 |
| ·重组质粒pSK-fnr operon的构建 | 第47-50页 |
| ·本章小结 | 第50页 |
| ·参考文献 | 第50-51页 |
| 第四章 高效大肠杆菌电转化感受态细胞制备和电转化条件的研究 | 第51-59页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·材料与方法 | 第51-54页 |
| ·菌种和质粒 | 第51页 |
| ·培养基和培养条件 | 第51页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第51-52页 |
| ·感受态细胞的电转化 | 第52-53页 |
| ·E. coli DH5α菌株的生长曲线 | 第53页 |
| ·不同生长时期制备的感受态细胞对电转化效率的影响 | 第53页 |
| ·装液量对感受态细胞电转化效率的影响 | 第53页 |
| ·电场强度和脉冲时间对电转化效率的影响 | 第53页 |
| ·转化后复苏时间对电转化效率的影响 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-57页 |
| ·E. coli DH5α的生长曲线 | 第54页 |
| ·不同生长时期制备的感受态细胞对电转化效率的影响 | 第54-55页 |
| ·装液量对感受态细胞电转化效率的影响 | 第55页 |
| ·电场强度和脉冲时间对电转化效率的影响 | 第55-56页 |
| ·转化后复苏时间对电转化效率的影响 | 第56-57页 |
| ·其它影响电转化效率的因素 | 第57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| ·参考文献 | 第58-59页 |
| 第五章 定向进化FNR提高菌体的乙醇耐受性 | 第59-73页 |
| ·引言 | 第59页 |
| ·材料与方法 | 第59-63页 |
| ·菌株和质粒 | 第59-60页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第60页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第60页 |
| ·培养基和培养条件 | 第60页 |
| ·易错PCR反应体系的摸索 | 第60页 |
| ·易错PCR扩增目的基因fnr | 第60-61页 |
| ·突变基因mfnr连接质粒载体片段 | 第61页 |
| ·电转化及筛选培养 | 第61-62页 |
| ·乙醇耐受性的验证 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-71页 |
| ·易错PCR反应体系的摸索 | 第63-64页 |
| ·易错PCR产物mfnr的扩增 | 第64页 |
| ·突变基因mfnr连接质粒载体片段 | 第64-67页 |
| ·感受态细胞的电转化及筛选 | 第67-68页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定 | 第68页 |
| ·乙醇耐受性的验证 | 第68-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| ·参考文献 | 第72-73页 |
| 第六章 定向进化FNR提高菌体的丁醇耐受性 | 第73-84页 |
| ·引言 | 第73-74页 |
| ·材料与方法 | 第74-76页 |
| ·菌株和质粒 | 第74页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第74页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第74页 |
| ·培养基和培养条件 | 第74页 |
| ·易错PCR反应体系的摸索 | 第74-75页 |
| ·易错PCR扩增目的基因 | 第75页 |
| ·突变基因mfnr连接质粒载体片段 | 第75页 |
| ·电转化及筛选培养 | 第75页 |
| ·丁醇耐受性的验证 | 第75-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-82页 |
| ·易错PCR反应体系的摸索 | 第76-77页 |
| ·易错PCR产物mfnr的扩增 | 第77页 |
| ·突变基因mfnr连接质粒载体片段 | 第77页 |
| ·感受态细胞的电转化及筛选 | 第77-78页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定 | 第78-79页 |
| ·丁醇耐受性的验证 | 第79-82页 |
| ·本章小结 | 第82页 |
| ·参考文献 | 第82-84页 |
| 第七章 定向进化FNR提高菌体的厌氧耐受性初探 | 第84-89页 |
| ·引言 | 第84页 |
| ·材料与方法 | 第84-85页 |
| ·菌株 | 第84-85页 |
| ·主要试剂 | 第85页 |
| ·培养基和培养条件 | 第85页 |
| ·生长曲线测定 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-87页 |
| ·大肠杆菌生长曲线测定 | 第85-87页 |
| ·本章小结 | 第87页 |
| ·参考文献 | 第87-89页 |
| 第八章 结论与展望 | 第89-91页 |
| ·结论 | 第89-90页 |
| ·课题展望 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读硕士学位论文期间主要科研成果 | 第92页 |