| 致谢 | 第4-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩写词表 | 第10-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1.1 异戊二烯简介 | 第14-15页 |
| 1.2 异戊二烯的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.1 异戊二烯在橡胶合成工业上的应用 | 第15-16页 |
| 1.2.2 异戊二烯在精细化学品合成工业上的应用 | 第16页 |
| 1.3 异戊二烯的生产方法 | 第16-18页 |
| 1.3.1 C5馏分分离法 | 第16-17页 |
| 1.3.2 脱氢法 | 第17-18页 |
| 1.3.3 化学合成法 | 第18页 |
| 1.3.4 生物合成法 | 第18页 |
| 1.4 异戊二烯的生物合成 | 第18-21页 |
| 1.4.1 代谢工程与合成生物学的发展 | 第18-19页 |
| 1.4.2 萜类物质的生物合成 | 第19-20页 |
| 1.4.3 异戊二烯生物合成进展 | 第20-21页 |
| 1.5 异戊二烯合成酶简介 | 第21-23页 |
| 1.5.1 异戊二烯合成酶的发现与酶学性质 | 第21-22页 |
| 1.5.2 异戊二烯合成酶的催化机理 | 第22-23页 |
| 1.6 本课题的研究内容及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 通过GAL4调控增强IspS表达水平 | 第25-44页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验设备与材料 | 第26-29页 |
| 2.2.1 仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.2.2 质粒和菌种 | 第27页 |
| 2.2.3 实验试剂与引物 | 第27-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.3.1 分子克隆操作 | 第29-30页 |
| 2.3.2 大肠杆菌Top 10感受态制备和热击转化 | 第30-31页 |
| 2.3.3 阳性克隆验证 | 第31页 |
| 2.3.4 酿酒酵母感受态细胞制备与电击转化 | 第31-32页 |
| 2.3.5 基因整合与敲除 | 第32-33页 |
| 2.3.6 质粒与菌株构建 | 第33-34页 |
| 2.3.7 酿酒酵母的摇瓶培养 | 第34-35页 |
| 2.3.8 异戊二烯和角鲨烯标准曲线制作 | 第35页 |
| 2.3.9 酿酒酵母RNA提取与实时荧光定量PCR | 第35-37页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第37-43页 |
| 2.4.1 异戊二烯和角鲨烯标准曲线 | 第37-38页 |
| 2.4.2 敲除GAL80构建葡萄糖控制型异戊二烯合成途径 | 第38-40页 |
| 2.4.3 GAL4过表达强化异戊二烯形成途径 | 第40-42页 |
| 2.4.4 IspS转录水平检测 | 第42-43页 |
| 2.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 定向进化提高异戊二烯合成酶催化活性 | 第44-58页 |
| 3.1 前言 | 第44-45页 |
| 3.2 实验设备与材料 | 第45页 |
| 3.2.1 仪器设备 | 第45页 |
| 3.2.2 质粒和菌种 | 第45页 |
| 3.2.3 实验试剂与引物 | 第45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-50页 |
| 3.3.1 分子克隆操作 | 第45-46页 |
| 3.3.2 酵母培养与代谢产物检测 | 第46-47页 |
| 3.3.3 菌株构建 | 第47-48页 |
| 3.3.4 ISPS定向进化方法 | 第48-49页 |
| 3.3.5 分子对接 | 第49-50页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第50-57页 |
| 3.4.1 高通量筛选方法的建立 | 第50-52页 |
| 3.4.2 定向进化提高异戊二烯合成酶活性 | 第52-53页 |
| 3.4.3 组合突变筛选最优突变体 | 第53-55页 |
| 3.4.4 突变点机理研究 | 第55-56页 |
| 3.4.5 结合表达调控与定向进化强化异戊二烯合成途径 | 第56-57页 |
| 3.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 第四章 高密度发酵生产异戊二烯 | 第58-67页 |
| 4.1 前言 | 第58-59页 |
| 4.2 实验设备与材料 | 第59页 |
| 4.2.1 仪器设备 | 第59页 |
| 4.2.2 质粒和菌种 | 第59页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-61页 |
| 4.3.1 分子克隆操作 | 第59页 |
| 4.3.2 酵母培养与代谢产物检测 | 第59-60页 |
| 4.3.3 发酵液中葡萄糖浓度的检测 | 第60页 |
| 4.3.4 好氧分批发酵 | 第60页 |
| 4.3.5 补料分化发酵 | 第60-61页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第61-66页 |
| 4.4.1 乙醇标准曲线制作 | 第61页 |
| 4.4.2 好氧分批发酵 | 第61-63页 |
| 4.4.3 高密度发酵 | 第63-65页 |
| 4.4.4 好氧发酵中异戊二烯的收率分析 | 第65-66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-70页 |
| 5.1 结论 | 第67-68页 |
| 5.2 展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第76页 |
