| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 第一篇 文献综述 | 第14-30页 |
| 第一章 家兔波氏杆菌的研究进展 | 第14-30页 |
| 1 兔支气管败血波氏杆菌的研究现状 | 第14-17页 |
| ·病原学 | 第14-15页 |
| ·流行病学 | 第15页 |
| ·致病性 | 第15页 |
| ·临床症状及病理变化 | 第15-16页 |
| ·诊断方法 | 第16页 |
| ·防治措施 | 第16-17页 |
| 2 支气管败血波氏杆菌OMP国内外研究现状 | 第17-20页 |
| ·菌毛 | 第17-18页 |
| ·丝状血凝素 | 第18页 |
| ·百日咳杆菌黏附素 | 第18页 |
| ·腺苷环化酶溶血素 | 第18-19页 |
| ·支气管细胞毒素 | 第19页 |
| ·OMPA | 第19页 |
| ·铁调节外膜蛋白 | 第19-20页 |
| ·孔蛋白 | 第20页 |
| ·脂蛋白 | 第20页 |
| ·保守假定蛋白质 | 第20页 |
| 3 疫苗研究 | 第20-22页 |
| ·全菌灭活苗 | 第20-21页 |
| ·弱毒苗 | 第21页 |
| ·亚单位疫苗 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-30页 |
| 第二篇 试验研究 | 第30-88页 |
| 第二章 家兔波氏杆菌靶蛋白基因的克隆及序列分析 | 第30-46页 |
| 摘要 | 第30页 |
| Abstract | 第30-31页 |
| 1 材料 | 第31页 |
| ·菌种和培养条件 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| 2 方法 | 第31-36页 |
| ·PCR扩增靶蛋白基因 | 第31-33页 |
| ·Bb基因组DNA的提取 | 第31页 |
| ·靶蛋白基因引物设计和合成 | 第31-32页 |
| ·PCR反应扩增体系 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第33页 |
| ·目的基因的克隆 | 第33-34页 |
| ·产物与T载体连接 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第34页 |
| ·转化 | 第34页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第34-36页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-42页 |
| ·靶蛋白基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·目的基因在T载体中的克隆及鉴定 | 第37-42页 |
| ·PCR法鉴定 | 第37-39页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第39-42页 |
| ·目的基因的序列分析 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-46页 |
| 第三章 蛋白原核表达纯化及免疫原性分析 | 第46-60页 |
| 摘要 | 第46页 |
| Abstract | 第46页 |
| 1 材料 | 第46-47页 |
| ·质粒和菌种 | 第46-47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-52页 |
| ·基因原核表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒和pET-28a(+)的双酶切处理及产物的回收 | 第47页 |
| ·连接反应 | 第47-48页 |
| ·连接产物转化 | 第48页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第48页 |
| ·基因的诱导表达 | 第48-49页 |
| ·重组质粒转化 | 第48-49页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第49页 |
| ·重组蛋白的可溶性检测 | 第49页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第50-51页 |
| ·制作标准曲线 | 第50-51页 |
| ·未知样品蛋白质浓度测定 | 第51页 |
| ·重组表达蛋白的免疫原性分析 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-58页 |
| ·原核表达载体的构建及验证 | 第52-55页 |
| ·基因的原核表达及重组蛋白可溶性检测 | 第55-56页 |
| ·基因的原核表达 | 第55-56页 |
| ·重组蛋白的可溶性检测 | 第56页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第56页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第56-57页 |
| ·重组表达蛋白的免疫原性分析 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58页 |
| 5 结论 | 第58-60页 |
| 第四章 蛋白免疫效果评价 | 第60-88页 |
| 摘要 | 第60页 |
| Abstract | 第60-62页 |
| 1 试验材料 | 第62页 |
| ·试验动物 | 第62页 |
| ·免疫原 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| 2 试验方法 | 第62-65页 |
| ·试验动物免疫及攻毒 | 第62-63页 |
| ·蛋白免疫效果评价 | 第63-65页 |
| ·小鼠血清IgG抗体及其亚型检测 | 第63页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞增殖试验 | 第63-64页 |
| ·小鼠淋巴细胞上清细胞因子检测 | 第64-65页 |
| 3 数据统计分析 | 第65页 |
| 4 结果 | 第65-84页 |
| ·小鼠攻毒前血清IgG抗体水平 | 第65-73页 |
| ·免疫攻毒前血清中ABC抗体水平 | 第65-66页 |
| ·免疫攻毒前血清中BPP抗体水平 | 第66-67页 |
| ·免疫攻毒前血清中CHP抗体水平 | 第67-68页 |
| ·免疫攻毒前血清中PL抗体水平 | 第68-69页 |
| ·免疫攻毒前血清中PPP抗体水平 | 第69-70页 |
| ·免疫攻毒前血清中全菌蛋白抗体水平 | 第70-71页 |
| ·各试验组抗体检测 | 第71-73页 |
| ·蛋白免疫保护力 | 第73-74页 |
| ·小鼠攻毒前血清IgG1及IgG2a抗体水平 | 第74-81页 |
| ·PL蛋白免疫组小鼠攻毒前血清IgG1及地G2a抗体水平 | 第74-76页 |
| ·PPP蛋白免疫组小鼠攻毒前血清IgG1及IgG2a抗体水平 | 第76-78页 |
| ·全菌蛋白免疫组小鼠攻毒前血清IgG1及IgG2a抗体水平 | 第78-81页 |
| ·各试验组攻毒前IgG1/IgG2a比较 | 第81页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第81-82页 |
| ·小鼠淋巴细胞上清细胞因子检测 | 第82-84页 |
| 5 讨论 | 第84-86页 |
| 6 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-88页 |
| 全文总结 | 第88-90页 |
| 附录 | 第90-94页 |
| 基因测序结果 | 第94-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 硕士期间发表及待发表的文章 | 第100页 |
