| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 哺乳动物受精机制的研究进展 | 第11-18页 |
| ·精子获能的相关机制 | 第12-13页 |
| ·顶体反应与精子上相关功能蛋白 | 第13-15页 |
| ·精卵融合相关机制 | 第15-18页 |
| ·CD9和CD81 | 第15页 |
| ·IZUMO1和JUNO间相互作用 | 第15-16页 |
| ·CRISPs家族 | 第16页 |
| ·ADAMs | 第16-17页 |
| ·PDIA3 | 第17页 |
| ·SLLP1和SAMP | 第17-18页 |
| 第二章 大鼠睾丸cDNA文库的构建 | 第18-29页 |
| ·前言 | 第18-19页 |
| ·实验材料 | 第19-21页 |
| ·主要试剂与材料 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19页 |
| ·常用溶液配制 | 第19-20页 |
| ·实验动物和实验菌株 | 第20页 |
| ·文库鉴定引物 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·大鼠睾丸组织总RNA提取 | 第21页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第21-22页 |
| ·使用长距离PCR扩增ds cDNA | 第22-23页 |
| ·使用CHROMA SPINTM+TE-400纯化柱纯化ds cDNA | 第23页 |
| ·Y187感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·酵母转化 | 第24页 |
| ·文库库容和质量检测 | 第24-25页 |
| ·实验结果 | 第25-28页 |
| ·大鼠睾丸总RNA的提取 | 第25页 |
| ·长片段合成双链cDNA | 第25-26页 |
| ·cDNA短片段的去除及PCR鉴定 | 第26-27页 |
| ·文库滴度测定及质量检测 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 pGBKT7-juno诱饵载体的构建 | 第29-46页 |
| ·前言 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·主要试剂与材料 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·常用溶液配制 | 第30-31页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第31页 |
| ·引物 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-37页 |
| ·PCR扩增juno基因 | 第32页 |
| ·构建pGBKT7-juno诱饵载体 | 第32-33页 |
| ·pGBKT7-juno诱饵载体克隆的验证 | 第33-34页 |
| ·pGBKT7-juno诱饵载体转化Y2H Gold酵母 | 第34页 |
| ·pGBKT7-juno的自激活检测 | 第34页 |
| ·pGBKT7-juno诱饵表达蛋白的细胞毒性检测 | 第34-35页 |
| ·pGBKT7-juno在酵母细胞中蛋白表达的检测 | 第35-37页 |
| ·实验结果 | 第37-45页 |
| ·重组质粒pGBKT7-juno的构建 | 第37-39页 |
| ·pGBKT7-juno诱饵载体自激活的检测 | 第39页 |
| ·pGBKT7-juno诱饵载体细胞毒性的检测 | 第39-40页 |
| ·pGBKT7-juno诱饵蛋白的western blot检测 | 第40-41页 |
| ·大鼠JUNO氨基酸序列的分析 | 第41-42页 |
| ·大鼠JUNO三维结构预测 | 第42页 |
| ·常见动物的JUNO成熟肽序列的分析 | 第42-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 酵母双杂交筛选与JUNO蛋白相互作用的蛋白 | 第46-60页 |
| ·前言 | 第46-47页 |
| ·实验材料 | 第47-49页 |
| ·主要试剂与材料 | 第47页 |
| ·主要仪器设备 | 第47页 |
| ·常用溶液配制 | 第47-48页 |
| ·实验菌株及质粒 | 第48页 |
| ·实验引物 | 第48-49页 |
| ·实验步骤 | 第49-53页 |
| ·使用pGBKT7-juno诱饵载体从酵母双杂交cDNA文库中筛选相互作用蛋白 | 第49-50页 |
| ·PCR鉴定筛选结果 | 第50页 |
| ·酵母提取质粒DNA | 第50-51页 |
| ·转化DH5α感受态扩增质粒 | 第51-52页 |
| ·回复杂交 | 第52-53页 |
| ·实验结果 | 第53-58页 |
| ·杂交效率 | 第53-54页 |
| ·筛选到克隆数 | 第54页 |
| ·筛选到阳性克隆数 | 第54页 |
| ·PCR扩增阳性克隆中插入片段大小 | 第54-55页 |
| ·回复杂交 | 第55页 |
| ·阳性质粒测序结果 | 第55-56页 |
| ·阳性结果分析 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
