| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 藜麦的营养成分 | 第13-16页 |
| 1.2.1 藜麦的宏量营养素 | 第14-15页 |
| 1.2.2 藜麦的微量营养素 | 第15-16页 |
| 1.2.3 藜麦的其他营养物质 | 第16页 |
| 1.3 藜麦的价值 | 第16-17页 |
| 1.3.1 食用价值 | 第16页 |
| 1.3.2 经济价值 | 第16-17页 |
| 1.3.3 观赏价值 | 第17页 |
| 1.3.4 药用价值 | 第17页 |
| 1.4 植物蛋白酶概况 | 第17-18页 |
| 1.5 蛋白酶的分离纯化方法 | 第18-19页 |
| 1.5.1 沉淀法 | 第18页 |
| 1.5.2 超滤法 | 第18页 |
| 1.5.3 层析法 | 第18-19页 |
| 1.5.4 萃取法 | 第19页 |
| 1.6 本课题的研究内容、意义 | 第19-23页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第19-20页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第20-23页 |
| 第二章 萌发藜麦酸性蛋白酶的分离纯化 | 第23-39页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验试剂与仪器 | 第23-25页 |
| 2.2.1 实验原料 | 第23页 |
| 2.2.2 化学药品 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.4 试剂的配置 | 第25页 |
| 2.3 萌发藜麦蛋白酶提取方法 | 第25-27页 |
| 2.3.1 藜麦芽的制备方法 | 第25-26页 |
| 2.3.2 萌发藜麦蛋白酶的粗提 | 第26页 |
| 2.3.3 萌发藜麦蛋白酶性质的确定 | 第26-27页 |
| 2.4 蛋白酶纯化方法 | 第27-30页 |
| 2.4.1 硫酸铵盐析 | 第27-28页 |
| 2.4.2 等电点沉淀 | 第28页 |
| 2.4.3 HiPrep~(TM)Q XL16/10阴离子交换柱纯化 | 第28页 |
| 2.4.4 AKTA start蛋白纯化仪的预处理 | 第28页 |
| 2.4.5 HiPrep~(TM)Q XL16/10阴离子交换柱的平衡 | 第28-29页 |
| 2.4.6 洗脱与收集 | 第29页 |
| 2.4.7 HiPrep~(TM)Q XL16/10阴离子交换柱的保存 | 第29页 |
| 2.4.8 AKTA start蛋白纯化仪的保存 | 第29页 |
| 2.4.9 萌发藜麦蛋白酶纯化指标的计算 | 第29页 |
| 2.4.10 蛋白质浓度的测定 | 第29-30页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第30-36页 |
| 2.5.1 牛血清蛋白标准曲线的绘制 | 第30页 |
| 2.5.2 L-酪氨酸标准曲线图 | 第30-31页 |
| 2.5.3 萌发藜麦蛋白酶酸碱性质的初步确定 | 第31页 |
| 2.5.4 提取缓冲液种类对萌发藜麦蛋白酶活力的影响 | 第31-32页 |
| 2.5.5 硫酸铵沉淀法纯化萌发藜麦蛋白酶 | 第32-33页 |
| 2.5.6 等电点沉淀法萌发藜麦蛋白酶 | 第33页 |
| 2.5.7 两种蛋白酶提纯方法的比较 | 第33-34页 |
| 2.5.8 AKTA纯化系统纯化藜麦蛋白酶 | 第34-35页 |
| 2.5.9 萌发藜麦蛋白酶分离纯化效率 | 第35-36页 |
| 2.6 分析与讨论 | 第36-37页 |
| 2.6.1 藜麦蛋白酶的性质 | 第36页 |
| 2.6.2 提取藜麦蛋白酶缓冲液的选择 | 第36-37页 |
| 2.6.3 藜麦蛋白酶纯化方法的选择 | 第37页 |
| 2.7 结论 | 第37-39页 |
| 第三章 萌发藜麦酸性蛋白酶鉴定及其性质研究 | 第39-51页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 材料 | 第39-41页 |
| 3.2.1 化学药品 | 第39-40页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第40页 |
| 3.2.3 实验相关试剂的配置 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.3.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶的配置 | 第41-42页 |
| 3.3.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶的配置 | 第42页 |
| 3.3.3 电泳 | 第42页 |
| 3.3.4 固定与染色 | 第42-43页 |
| 3.3.5 脱色 | 第43页 |
| 3.4 萌发藜麦酸性蛋白酶酶学性质 | 第43-44页 |
| 3.4.1 萌发藜麦酸性蛋白酶的最适反应温度 | 第43页 |
| 3.4.2 萌发藜麦酸性蛋白酶的热稳定性 | 第43页 |
| 3.4.3 萌发藜麦酸性蛋白酶的最适反应pH值 | 第43页 |
| 3.4.4 萌发藜麦酸性蛋白酶的pH值稳定性 | 第43页 |
| 3.4.5 金属离子对萌发藜麦酸性蛋白酶活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.6 酶促反应动力学 | 第44页 |
| 3.4.7 抑制剂对萌发藜麦酸性蛋白酶活的影响 | 第44页 |
| 3.5 结果 | 第44-49页 |
| 3.5.1 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第44-45页 |
| 3.5.2 萌发藜麦酸性蛋白酶的最适反应温度 | 第45-46页 |
| 3.5.3 萌发藜麦酸性蛋白酶的热稳定性 | 第46页 |
| 3.5.4 萌发藜麦酸性蛋白酶的最适反应pH值 | 第46-47页 |
| 3.5.5 萌发藜麦酸性蛋白酶的pH稳定性 | 第47-48页 |
| 3.5.6 金属离子对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第48页 |
| 3.5.7 萌发藜麦蛋白酶的酶促反应动力学 | 第48-49页 |
| 3.5.8 抑制剂对萌发藜麦酸性蛋白酶的影响 | 第49页 |
| 3.6 本章小结 | 第49-51页 |
| 第四章 萌发藜麦酸性蛋白酶提取条件的优化 | 第51-66页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 材料 | 第51页 |
| 4.2.2 主要药品 | 第51-52页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-53页 |
| 4.3.1 萌发藜麦酸性蛋白酶酶活力检测方法 | 第52页 |
| 4.3.2 蛋白含量测定方法 | 第52-53页 |
| 4.4 提取萌发藜麦酸性蛋白酶生产条件的优化 | 第53-55页 |
| 4.4.1 提取萌发藜麦酸性蛋白酶缓冲液pH的优化 | 第53页 |
| 4.4.2 萌发藜麦酸性蛋白酶提取时间的优化 | 第53页 |
| 4.4.3 萌发藜麦酸性蛋白酶提取料液比的优化 | 第53-54页 |
| 4.4.4 萌发藜麦培养时间对酸性蛋白酶活力的影响 | 第54页 |
| 4.4.5 萌发温度对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第54-55页 |
| 4.4.6 萌发湿度对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第55页 |
| 4.4.7 藜麦种子处理方法对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第55页 |
| 4.5 提取条件对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第55-59页 |
| 4.5.1 提取缓冲液pH对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第55-56页 |
| 4.5.2 提取时间对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第56-57页 |
| 4.5.3 料液比对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第57页 |
| 4.5.4 正交实验确定最佳工艺参数 | 第57-59页 |
| 4.6 培养条件对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第59-64页 |
| 4.6.1 培养时间对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第59页 |
| 4.6.2 培养温度对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第59-60页 |
| 4.6.3 萌发湿度对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第60-61页 |
| 4.6.4 藜麦种子处理方法对萌发藜麦酸性蛋白酶活力的影响 | 第61-62页 |
| 4.6.5 正交实验确定藜麦最佳萌发条件 | 第62-64页 |
| 4.7 本章小结 | 第64-66页 |
| 第五章 萌发藜麦天冬氨酸蛋白酶的表达 | 第66-74页 |
| 5.1 引言 | 第66页 |
| 5.2 材料与方法 | 第66-67页 |
| 5.2.1 菌种、质粒 | 第66页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第66-67页 |
| 5.2.3 主要试剂 | 第67页 |
| 5.3 实验方法 | 第67-70页 |
| 5.3.1 藜麦天冬氨酸蛋白酶基因序列及氨基酸序列的分析 | 第67-69页 |
| 5.3.2 藜麦天冬氨酸蛋白酶表达菌株的构建及诱导表达 | 第69页 |
| 5.3.3 引物设计 | 第69页 |
| 5.3.4 质粒提取 | 第69页 |
| 5.3.5 酶切与转化 | 第69-70页 |
| 5.3.6 阳性重组菌株的筛选 | 第70页 |
| 5.3.7 藜麦天冬氨酸蛋白酶的诱导表达纯化 | 第70页 |
| 5.3.8 藜麦天冬氨酸蛋白酶的纯化 | 第70页 |
| 5.3.9 藜麦天冬氨酸蛋白酶酶活力检测方法 | 第70页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第70-72页 |
| 5.4.1 质粒提取及转化结果 | 第70-71页 |
| 5.4.2 藜麦天冬氨酸蛋白酶表达结果 | 第71-72页 |
| 5.5 本章小结 | 第72-74页 |
| 第六章 结论与展望 | 第74-78页 |
| 6.1 结论 | 第74-75页 |
| 6.2 本研究的创新点 | 第75页 |
| 6.3 展望 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 硕士期间主要科研成果 | 第86页 |
