| 摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-22页 |
| ·羊痘病毒概述 | 第13-16页 |
| ·羊痘病毒的病原学特征 | 第13页 |
| ·羊痘病毒的危害及临床症状 | 第13-14页 |
| ·羊痘病毒诊断技术的发展 | 第14-16页 |
| ·病毒脱壳研究进展 | 第16-18页 |
| ·RNA干扰技术 | 第18-21页 |
| ·原理 | 第19-20页 |
| ·应用于基因敲除 | 第20-21页 |
| ·研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 绵羊痘病毒固原株的分离与鉴定 | 第22-28页 |
| ·材料与方法 | 第22-23页 |
| ·病料样品 | 第22页 |
| ·分离用细胞 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·病料样品的处理 | 第22页 |
| ·动物感染 | 第22-23页 |
| ·细胞培养分离病毒 | 第23页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第23页 |
| ·PCR鉴定 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-26页 |
| ·动物感染 | 第23-24页 |
| ·病毒分离 | 第24-25页 |
| ·Vero细胞感染GY毒株后免疫荧光检测 | 第25页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 SPPV ORF051和ORF065基因的生物学分析及其siRNA设计 | 第28-37页 |
| ·试验材料 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-29页 |
| ·ORF051和ORF065基因的PCR扩增 | 第28页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第28-29页 |
| ·靶向抑制SPPV ORF051和ORF065的siRNA设计 | 第29页 |
| ·试验结果 | 第29-35页 |
| ·SPPV ORF051和ORF065的扩增 | 第29页 |
| ·S P P V O R F 05 1 和 06 5 生物信息学分析 | 第29-32页 |
| ·靶向抑制SPPV ORF051和 065 siRNA设计 | 第32-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 靶向抑制SPPV的RNA聚合酶的siRNA的初步筛选 | 第37-42页 |
| ·材料及方法 | 第37-39页 |
| ·毒株、菌株、细胞及载体 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·仪器设备 | 第37页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·ORF051和ORF065基因的PCR扩增 | 第38页 |
| ·构建pEGFP-N1重组载体 | 第38页 |
| ·重组质粒转染BHK-21细胞 | 第38-39页 |
| ·靶向SPPV ORF051和 065 siRNA的筛选 | 第39页 |
| ·试验结果 | 第39-41页 |
| ·pGEGFP-ORF051和pGEGFP-ORF065重组质粒的鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒转染效果的检测 | 第39页 |
| ·干扰效果的检测 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第五章一步生长曲线的绘制及适应表达的Vero细胞系的建立 | 第42-48页 |
| ·材料和方法 | 第42-44页 |
| ·毒株及主要试剂 | 第42页 |
| ·仪器设备 | 第42页 |
| ·质粒标准品的转化 | 第42页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第42-43页 |
| ·一步生长曲线的绘制 | 第43页 |
| ·引物设计 | 第43页 |
| ·ORF051和ORF065基因的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·构建plv-puro-flag重组载体 | 第44页 |
| ·嘌呤霉素最低致死浓度的筛选 | 第44页 |
| ·建立细胞系 | 第44页 |
| ·抗性细胞的鉴定 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-47页 |
| ·质粒标准品的转化 | 第44-45页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第45页 |
| ·一步生长曲线的绘制 | 第45-46页 |
| ·plv-puro-flag-ORF051和plv-puro-flag-ORF065重组载体酶切鉴定 | 第46页 |
| ·嘌呤霉素最低致死浓度的筛选 | 第46页 |
| ·抗性细胞的鉴定 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·一步生长曲线的绘制 | 第47页 |
| ·细胞系的建立 | 第47-48页 |
| 第六章 全文结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55-56页 |
| 导师简介 | 第56页 |
