目录 | 第1-6页 |
本文中的缩略词 | 第6-8页 |
摘要 | 第8-11页 |
Abstract | 第11-15页 |
前言 | 第15-29页 |
1. 副溶血弧菌的生物学特性 | 第15页 |
2. 副溶血弧菌致病性与其主要毒力因子 | 第15-19页 |
·耐热直接溶血素(TDH) | 第16页 |
·耐热相关溶血素(TRH) | 第16-17页 |
·III 型分泌系统(T3SS) | 第17-19页 |
·粘附因子 | 第19页 |
3. 弧菌生物膜形成 | 第19-24页 |
·鞭毛 | 第20-21页 |
·IV 型菌毛 | 第21-22页 |
·多糖 | 第22-23页 |
·c-di-GMP 信号分子 | 第23-24页 |
4. 弧菌密度感应系统与其核心调控子 | 第24-26页 |
5. 弧菌毒力调控子 ToxR | 第26页 |
6. 调控子蛋白 VPA0606 | 第26页 |
7. 细菌基因转录调控 | 第26-27页 |
8. 研究目的、研究假设和技术路线 | 第27-29页 |
材料和方法 | 第29-45页 |
1. 材料 | 第29-31页 |
·菌株和质粒 | 第29页 |
·主要试剂(盒) | 第29页 |
·主要仪器 | 第29-30页 |
·本文所用引物汇总 | 第30-31页 |
2. 方法 | 第31-45页 |
·菌种准备与培养 | 第31页 |
·总 RNA 提取 | 第31-32页 |
·逆转录反应 | 第32-33页 |
·操纵子鉴定 | 第33页 |
·Real time Quantitative PCR (qRT-PCR) | 第33-34页 |
·引物延伸实验(Primer extension assay) | 第34-36页 |
·LacZ 报告基因融合实验(LacZ fusion) | 第36-37页 |
·凝胶迁移实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA) | 第37-39页 |
·DNase I 足迹实验(DNase I footprinting) | 第39-41页 |
·DNA 片段的测序反应 | 第41-42页 |
·Western blot | 第42-45页 |
结果与讨论 | 第45-71页 |
1. OpaR 对自身基因、qrr2-4 及 aphA 的转录调控机制 | 第45-53页 |
·OpaR 与其同源蛋白的同源性比对 | 第45-46页 |
·OpaR 及其同源蛋白的 DNA 识别基序 | 第46-48页 |
·OpaR 直接抑制自身基因的表达 | 第48页 |
·OpaR 直接激活 qrr2-4 的表达 | 第48-49页 |
·OpaR 直接抑制 aphA 的表达 | 第49-50页 |
·ΔopaR 是非极性突变株 | 第50页 |
·启动子区结构 | 第50-51页 |
·讨论 | 第51-53页 |
2. AphA 对自身基因、qrr2-4 和 opaR 的转录调控机制研究 | 第53-60页 |
·AphA 与其同源蛋白的同源性比对 | 第53页 |
·AphA 的 DNA 识别基序 | 第53-55页 |
·AphA 在低密度下高表达 | 第55页 |
·AphA 直接抑制自身基因的表达 | 第55-56页 |
·AphA 抑制 qrr2-4 的表达 | 第56-57页 |
·AphA 直接抑制 opaR 的表达 | 第57-58页 |
·ΔaphA 是非极性突变株 | 第58页 |
·启动子区结构 | 第58-59页 |
·讨论 | 第59-60页 |
3. 培养条件的选择 | 第60-63页 |
·M 肉汤培养条件下不同菌密度对 opaR 表达调控 | 第60页 |
·HI-0.5%S 肉汤培养条件下密度对关键调控子基因的表达调控 | 第60-63页 |
4. HI-0.5%S 肉汤中 AphA 对 opaR、aphA、toxR 和 vpa0607 的调控机制研究 | 第63-65页 |
·AphA 抑制 opaR 的转录表达 | 第63-64页 |
·AphA 直接抑制自身基因的转录表达 | 第64页 |
·AphA 间接抑制 toxR 的转录表达 | 第64-65页 |
·AphA 间接激活 vpa0607-0606 的转录表达 | 第65页 |
5. HI-0.5%S 肉汤中 OpaR 对 opaR、aphA、toxR 和 vpa0607 的调控机制研究 | 第65-68页 |
·OpaR 直接抑制自身基因的转录表达 | 第65-66页 |
·OpaR 直接抑制 aphA 的转录表达 | 第66页 |
·OpaR 不调控 toxR 的转录表达 | 第66-67页 |
·OpaR 对 vpa0607-0606 的转录调控 | 第67-68页 |
6. 小结 | 第68-71页 |
参考文献 | 第71-83页 |
博士期间完成的其它课题 | 第83-109页 |
综述 | 第109-117页 |
参考文献 | 第114-117页 |
附录 | 第117-123页 |
攻读博士学位期间所获奖励和发表的学术论文 | 第123-125页 |
个人简历 | 第125-126页 |
致谢 | 第126-127页 |