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AphA和OpaR对副溶血弧菌密度感应系统相关基因的转录调控机制研究

目录第1-6页
本文中的缩略词第6-8页
摘要第8-11页
Abstract第11-15页
前言第15-29页
 1. 副溶血弧菌的生物学特性第15页
 2. 副溶血弧菌致病性与其主要毒力因子第15-19页
   ·耐热直接溶血素(TDH)第16页
   ·耐热相关溶血素(TRH)第16-17页
   ·III 型分泌系统(T3SS)第17-19页
   ·粘附因子第19页
 3. 弧菌生物膜形成第19-24页
   ·鞭毛第20-21页
   ·IV 型菌毛第21-22页
   ·多糖第22-23页
   ·c-di-GMP 信号分子第23-24页
 4. 弧菌密度感应系统与其核心调控子第24-26页
 5. 弧菌毒力调控子 ToxR第26页
 6. 调控子蛋白 VPA0606第26页
 7. 细菌基因转录调控第26-27页
 8. 研究目的、研究假设和技术路线第27-29页
材料和方法第29-45页
 1. 材料第29-31页
   ·菌株和质粒第29页
   ·主要试剂(盒)第29页
   ·主要仪器第29-30页
   ·本文所用引物汇总第30-31页
 2. 方法第31-45页
   ·菌种准备与培养第31页
   ·总 RNA 提取第31-32页
   ·逆转录反应第32-33页
   ·操纵子鉴定第33页
   ·Real time Quantitative PCR (qRT-PCR)第33-34页
   ·引物延伸实验(Primer extension assay)第34-36页
   ·LacZ 报告基因融合实验(LacZ fusion)第36-37页
   ·凝胶迁移实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)第37-39页
   ·DNase I 足迹实验(DNase I footprinting)第39-41页
   ·DNA 片段的测序反应第41-42页
   ·Western blot第42-45页
结果与讨论第45-71页
 1. OpaR 对自身基因、qrr2-4 及 aphA 的转录调控机制第45-53页
   ·OpaR 与其同源蛋白的同源性比对第45-46页
   ·OpaR 及其同源蛋白的 DNA 识别基序第46-48页
   ·OpaR 直接抑制自身基因的表达第48页
   ·OpaR 直接激活 qrr2-4 的表达第48-49页
   ·OpaR 直接抑制 aphA 的表达第49-50页
   ·ΔopaR 是非极性突变株第50页
   ·启动子区结构第50-51页
   ·讨论第51-53页
 2. AphA 对自身基因、qrr2-4 和 opaR 的转录调控机制研究第53-60页
   ·AphA 与其同源蛋白的同源性比对第53页
   ·AphA 的 DNA 识别基序第53-55页
   ·AphA 在低密度下高表达第55页
   ·AphA 直接抑制自身基因的表达第55-56页
   ·AphA 抑制 qrr2-4 的表达第56-57页
   ·AphA 直接抑制 opaR 的表达第57-58页
   ·ΔaphA 是非极性突变株第58页
   ·启动子区结构第58-59页
   ·讨论第59-60页
 3. 培养条件的选择第60-63页
   ·M 肉汤培养条件下不同菌密度对 opaR 表达调控第60页
   ·HI-0.5%S 肉汤培养条件下密度对关键调控子基因的表达调控第60-63页
 4. HI-0.5%S 肉汤中 AphA 对 opaR、aphA、toxR 和 vpa0607 的调控机制研究第63-65页
   ·AphA 抑制 opaR 的转录表达第63-64页
   ·AphA 直接抑制自身基因的转录表达第64页
   ·AphA 间接抑制 toxR 的转录表达第64-65页
   ·AphA 间接激活 vpa0607-0606 的转录表达第65页
 5. HI-0.5%S 肉汤中 OpaR 对 opaR、aphA、toxR 和 vpa0607 的调控机制研究第65-68页
   ·OpaR 直接抑制自身基因的转录表达第65-66页
   ·OpaR 直接抑制 aphA 的转录表达第66页
   ·OpaR 不调控 toxR 的转录表达第66-67页
   ·OpaR 对 vpa0607-0606 的转录调控第67-68页
 6. 小结第68-71页
参考文献第71-83页
博士期间完成的其它课题第83-109页
综述第109-117页
 参考文献第114-117页
附录第117-123页
攻读博士学位期间所获奖励和发表的学术论文第123-125页
个人简历第125-126页
致谢第126-127页

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