芒草驯养牛瘤胃微生物Fosmid文库中木聚糖酶基因的筛选、克隆及表达分析
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-22页 |
| ·生物质资源利用的意义 | 第9-10页 |
| ·生物质的主要种类 | 第10-12页 |
| ·纤维素 | 第10-11页 |
| ·半纤维素 | 第11-12页 |
| ·木质素 | 第12页 |
| ·芒草 | 第12-13页 |
| ·木聚糖酶研究现状 | 第13-17页 |
| ·木聚糖酶 | 第13-15页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第15-16页 |
| ·木聚糖酶新基因的克隆 | 第16-17页 |
| ·瘤胃微生物 | 第17-19页 |
| ·宏基因组学 | 第19-20页 |
| ·选题目的及意义 | 第20-21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-33页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·供试菌株及质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂、药品 | 第22-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-33页 |
| ·产木聚糖酶菌株的筛选 | 第24页 |
| ·Fosmid质粒提取 | 第24-26页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第26页 |
| ·克隆文库的构建及筛选 | 第26-27页 |
| ·目的基因的分析 | 第27页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第29页 |
| ·粗酶液的制备 | 第29-30页 |
| ·DNS法测木聚糖酶酶活力 | 第30-31页 |
| ·蛋白质酶学分析 | 第31-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-47页 |
| ·Fosmid文库的初筛 | 第33页 |
| ·克隆文库的构建 | 第33-35页 |
| ·克隆文库筛选 | 第35-36页 |
| ·A4重组质粒测序及序列分析 | 第36-39页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·最佳诱导温度的确定 | 第41页 |
| ·最佳诱导剂剂量的确定 | 第41-42页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第42页 |
| ·蛋白质酶学分析 | 第42-47页 |
| ·最适温度的研究 | 第42-43页 |
| ·最适pH的研究 | 第43-44页 |
| ·温度稳定性 | 第44-45页 |
| ·pH稳定性 | 第45页 |
| ·底物专一性 | 第45页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| 5 结论、创新点及下一步工作计划 | 第51-53页 |
| ·结论 | 第51页 |
| ·创新点 | 第51页 |
| ·下一步工作计划 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
