| 摘要 | 第1-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 毛囊及毛发生长发育的过程 | 第10-12页 |
| ·毛囊的形态发生及发育周期 | 第10-11页 |
| ·毛囊形态发生的分子机制 | 第11-12页 |
| 2 FGF5在动物毛发生长和发育过程中的调控作用 | 第12-14页 |
| ·FGF家族基因概述及其在毛囊生长周期中的表达 | 第12-13页 |
| ·FGF5与动物毛发周期生长 | 第13-14页 |
| 3 MICRORNA研究进展及在皮肤发育中的调控作用 | 第14-17页 |
| ·MICRORNA概述及其调控靶基因机制 | 第14-15页 |
| ·MICRORNA与皮肤形态的发生及其疾病的发生 | 第15-16页 |
| ·MICRORNA中LET-7的概述及与皮肤的关系 | 第16-17页 |
| 4 本实验研究的意义和目的 | 第17-19页 |
| 实验一构建FGF5基因3'-非翻译区双荧光素报告载体 | 第19-33页 |
| 1 材料和方法 | 第19-20页 |
| ·实验样本 | 第19页 |
| ·实验仪器、试剂及耗材 | 第19-20页 |
| ·实验中主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-27页 |
| ·TRIZOL法提取羊驼皮肤组织总RNA | 第20-21页 |
| ·RT-PCR扩增靶基因FGF5的3'UTR | 第21-23页 |
| ·cDNA的合成 | 第21页 |
| ·FGF5基因3'UTR扩增产物的纯化及克隆 | 第21-23页 |
| ·靶基因FGF5 3'-UTR双荧光素报告载体的构建 | 第23-25页 |
| ·克隆质粒的提取及双酶切鉴定 | 第23-24页 |
| ·双荧光素报告载体与靶基因的双酶切及连接 | 第24-25页 |
| ·FGF5荧光素报告载体与LET-7B真核过表达载体转染293T细胞 | 第25-27页 |
| ·重组质粒菌液的无内毒素质粒提取 | 第25-26页 |
| ·293T细胞的培养 | 第26-27页 |
| ·FGF5 3'-UTR荧光素报告载体和let-7b真核载体共转染293T细胞,并检测细胞内荧光信号的变化 | 第27页 |
| 3 结果和分析 | 第27-32页 |
| ·羊驼皮肤总RNA纯度及完整性的鉴定 | 第27-28页 |
| ·靶基因FGF5 3'-UTR的扩增,克隆及双酶切 | 第28-29页 |
| ·靶基因FGF5 3'-UTR双荧光素报告载体的构建 | 第29-30页 |
| ·荧光信号变化验证FGF5和LET-7B的靶向关系 | 第30-32页 |
| 4 小结 | 第32-33页 |
| 实验二 LET-7B真核过表达载体转染羊驼成纤维细胞并检测基因表达变化 | 第33-43页 |
| 1 材料和方法 | 第33-36页 |
| ·实验样本 | 第33页 |
| ·实验仪器、试剂及耗材 | 第33-34页 |
| ·实验中的主要仪器设备 | 第33页 |
| ·实验试剂及耗材 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-36页 |
| ·let-7b真核过表达载体转染羊驼皮肤成纤维细胞 | 第34页 |
| ·羊驼皮肤成纤维细胞RNA的提取及cDNA的合成 | 第34-35页 |
| ·实时荧光定量PCR检测转染后靶基因表达水平 | 第35-36页 |
| 2 结果 | 第36-42页 |
| ·LET-7B转染后成纤维细胞生长形态的观察 | 第36-37页 |
| ·LET-7B转染羊驼成纤维细胞的效率 | 第37-38页 |
| ·成纤维细胞总RNA完整性的鉴定 | 第38-39页 |
| ·REAL-TIME PCR结果 | 第39-42页 |
| 3 小结 | 第42-43页 |
| 实验三 蛋白印记检测转染后细胞中FGF5及FGFR1表达量变化 | 第43-48页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·实验样本 | 第43页 |
| ·实验中主要仪器设备,试剂和耗材 | 第43-44页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第43页 |
| ·实验中主要试剂及配制 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-46页 |
| ·成纤维细胞蛋白的提取及样品制备 | 第44-45页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第45页 |
| ·蛋白质转移与杂交 | 第45-46页 |
| ·蛋白免疫印记图像分析 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-47页 |
| 3 小结 | 第47-48页 |
| 实验四 免疫细胞化学分析转染后FGF5表达 | 第48-52页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| ·实验样本 | 第48页 |
| ·实验主要仪器设备与试剂耗材 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·成纤维细胞的复苏及爬片 | 第48-49页 |
| ·细胞免疫化学实验 | 第49-50页 |
| 2 结果 | 第50页 |
| 3 小结 | 第50-52页 |
| 讨论 | 第52-55页 |
| 1 LET-7B与FGF5基因的靶向关系 | 第52-53页 |
| 2 FGFS家族在毛发生长周期中的表达及作用 | 第53页 |
| 3 LET-7B与FGF5及其受体FGFR1调控关系 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| Abstract | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
