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栉孔扇贝(Chlamys farreri)幼虫和成体组织细胞的体外培养体系建立和特征分析

摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第一章 前 言第15-56页
 1. 贝类组织细胞的特征及其体外培养的研究进展第20-43页
   ·贝类胚胎和幼虫细胞的特征及其体外培养进展第21-28页
     ·贝类胚胎发育的特征第21-22页
     ·贝类幼虫细胞的分化特征和基因表达特征第22-23页
     ·环境因素对胚胎和幼虫发育的影响第23-24页
     ·贝类胚胎和幼虫细胞的体外培养研究成果第24-28页
       ·细胞解离条件的摸索第25页
       ·除菌方式第25-26页
       ·培养基优化第26-27页
       ·促贴壁因子第27页
       ·体外细胞存活能力和分裂能力第27页
       ·细胞分化研究第27-28页
   ·贝类血淋巴细胞的特征及其体外培养进展第28-31页
     ·贝类血淋巴细胞的分布第28页
     ·贝类血淋巴细胞的分类和形态特征第28-29页
     ·贝类血淋巴细胞的功能和主要成分第29-30页
     ·贝类血淋巴细胞的体外培养研究进展第30-31页
   ·贝类鳃细胞的特征及其体外培养进展第31-33页
     ·贝类鳃丝和鳃细胞的组织学特征第31页
     ·贝类鳃细胞的体外培养进展第31-33页
   ·贝类心脏细胞的特征及其体外培养进展第33-34页
     ·贝类心脏的生物学特征第33页
     ·贝类心脏细胞的体外培养进展第33-34页
   ·贝类外套膜细胞的特征及其体外培养进展第34-36页
     ·贝类外套膜的生物学特征第34页
     ·贝类外套膜细胞的体外培养进展第34-36页
   ·贝类生殖腺细胞的特征及其体外培养进展第36-37页
     ·贝类生殖腺的生物学特征简述第36页
     ·贝类生殖腺细胞的体外培养进展第36-37页
   ·贝类其他组织细胞的体外培养进展第37-43页
     ·贝类消化腺细胞体外培养进展第37页
     ·贝类足细胞的体外培养进展第37页
     ·贝类神经细胞的体外培养进展第37页
     ·贝类肿瘤细胞的生物学特征和体外培养进展第37-43页
 2. 其他海洋无脊椎动物细胞培养研究概况第43-49页
   ·海绵动物(Spongia)第44-45页
   ·腔肠动物门(Cnidaria)第45-46页
   ·节肢动物门-甲壳纲(Crustace)第46-47页
   ·棘皮动物门(Echinodermata)第47-49页
 3. 体外转化构建细胞系的研究概述第49-54页
   ·物理方法诱导第49-50页
   ·化学方法诱导第50-51页
   ·生物方法诱导第51-54页
     ·细胞融合第51-52页
     ·病毒感染第52页
     ·致癌基因的转导第52-54页
 4. 本论文的研究意义和目的第54-56页
第二章 栉孔扇贝担轮幼虫细胞连续培养体系的建立及特征第56-85页
 1. 材料和方法第56-64页
   ·材料第56-59页
   ·实验方法第59-64页
     ·栉孔扇贝担轮幼虫细胞的原代培养第59-61页
       ·人工诱导雌雄配子排放第59-60页
       ·人工授精第60页
       ·幼虫的清洗第60-61页
       ·担轮幼虫细胞的解离第61页
       ·栉孔扇贝担轮幼虫细胞的接种第61页
     ·细胞培养体系的优化第61-62页
     ·细胞的传代培养、冻存与复苏第62页
     ·体外培养的栉孔扇贝担轮细胞的特征分析第62-64页
       ·细胞鉴定第62页
       ·细胞化学染色第62-63页
       ·流式细胞仪检测第63页
       ·担轮幼虫体外培养细胞的整体原位杂交第63-64页
       ·担轮幼虫个体或体外培养细胞的免疫组化第64页
 2. 实验结果第64-80页
   ·担轮幼虫细胞解离方法的筛选第64-66页
   ·担轮幼虫细胞体外培养的培养基优化第66-69页
     ·FBS 最适宜添加浓度的确定第66页
     ·栉孔扇贝血清最适添加浓度的确定第66-67页
     ·栉孔扇贝卵黄提取液最适添加浓度的确定第67页
     ·生长因子对体外培养栉孔扇贝担轮幼虫细胞的影响第67-69页
   ·担轮幼虫继代培养细胞的特征比较第69-74页
   ·栉孔扇贝传代细胞冻存复苏后的生长状态第74页
   ·传代细胞的功能基因表达第74-76页
     ·piwi 基因的原位表达第74-75页
     ·phb2 基因的原位表达第75-76页
   ·传代细胞的分化特征第76-80页
     ·肌细胞的分化第76-78页
     ·神经细胞的分化第78-80页
 3. 讨论第80-85页
   ·栉孔扇贝担轮幼虫细胞体外培养方法的建立第80-82页
   ·担轮幼虫的细胞类型以及体外培养潜力第82-84页
   ·担轮幼虫细胞在体内外的特征比较第84页
   ·栉孔扇贝担轮幼虫细胞体外培养体系的应用价值第84-85页
第三章 栉孔扇贝成体组织细胞体外培养体系的建立和特征第85-110页
 1. 材料和方法第85-91页
   ·材料第85-86页
   ·实验方法第86-91页
     ·栉孔扇贝的无菌处理第86页
     ·栉孔扇贝成体组织细胞的原代培养第86-87页
     ·培养体系的优化第87页
     ·栉孔扇贝成体组织细胞的继代培养第87-88页
     ·栉孔扇贝成体组织细胞的体外诱导转化第88-91页
       ·构建 SV40LT 与报告基因 EGFP 共表达质粒第88-89页
       ·pSV40LT-IRES-EGFP 重组真核表达质粒转化人的 293FT 细胞第89页
       ·重组慢病毒颗粒的包装第89页
       ·病毒滴度的检测第89-90页
       ·重组慢病毒感染栉孔扇贝成体组织体外培养细胞第90-91页
 2. 实验结果第91-103页
   ·体外培养细胞培养条件的优化第91-93页
   ·体外培养细胞的形态学特征第93-98页
   ·体外原代培养细胞的迁移和贴壁特性第98-99页
   ·血淋巴细胞和鳃细胞的传代培养第99-100页
   ·栉孔扇贝成体组织细胞的体外转化第100-103页
     ·pSV40LT-IRES-EGFP 质粒的构建第100-101页
     ·pSV40LT-IRES-EGFP 质粒的表达第101-102页
     ·SV40LT-IRES-EGFP 慢病毒颗粒的包装第102页
     ·重组慢病毒的滴度检测第102-103页
     ·使用重组慢病毒感染体外培养的原代栉孔扇贝血淋巴第103页
     ·多种转基因方法效果比较第103页
 3. 讨论第103-110页
   ·栉孔扇贝成体组织细胞的体外培养方法第103-107页
   ·栉孔扇贝成体组织细胞培养体系的应用价值第107-108页
   ·利用栉孔扇贝体外培养细胞进行转基因研究的可行性第108-110页
总结第110-111页
参考文献第111-129页
致谢第129-131页
个人简介第131-132页
学术成果第132-133页

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