| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-26页 |
| ·香菇的生物学特性简介 | 第12-15页 |
| ·香菇的分类和分布 | 第12页 |
| ·香菇的形态特征 | 第12页 |
| ·香菇的营养价值和药用价值 | 第12-13页 |
| ·高温型香菇武香一号的特性概述 | 第13-14页 |
| ·冷冻害对香菇的影响 | 第14-15页 |
| ·抗冻蛋白的作用机理和研究进展 | 第15-18页 |
| ·冷驯化的概念 | 第15页 |
| ·冷相关蛋白的分类 | 第15-17页 |
| ·COR基因的作用机理 | 第17-18页 |
| ·食用菌遗传转化的概述 | 第18-23页 |
| ·选择标记 | 第18-19页 |
| ·转化方法 | 第19-23页 |
| ·食用菌启动子 | 第23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| ·白菜抗寒基因COR基因的研究目的和意义 | 第23-24页 |
| ·香菇遗传转化体系的研究目的和意义 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-37页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·引物信息 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-37页 |
| ·常规实验方法 | 第28-30页 |
| ·质粒DNA提取 | 第28页 |
| ·冷诱导 | 第28页 |
| ·总RNA的提取及反转录 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第29页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第29-30页 |
| ·根癌农杆菌转化子的验证 | 第30页 |
| ·COR基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·简并引物的设计 | 第30页 |
| ·COR片段的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·COR片段的回收 | 第31页 |
| ·回收片段与T载体的连接 | 第31页 |
| ·连接载体的转化 | 第31页 |
| ·pcDNA3.1(+)-COR载体的构建 | 第31-32页 |
| ·COR基因片段和质粒pcDNA3.1(+)-nptⅡ的双酶切反应 | 第31-32页 |
| ·重组载体pcDNA3.1(+)-COR的连接转化实验 | 第32页 |
| ·香菇双元表达载体pDHt/sk-hyg-COR的构建 | 第32-33页 |
| ·PgpdA-COR-TtrpC片段的克隆 | 第32页 |
| ·PgpdA-COR-TtrpC片段和质粒pDHt/sk-hyg的双酶切反应 | 第32-33页 |
| ·重组载体pcDNA3.1(+)-COR的连接转化实验 | 第33页 |
| ·重组载体pcDNA3.1(+)-COR的双酶切验证 | 第33页 |
| ·香菇对潮霉素敏感性的测定 | 第33-34页 |
| ·抗生素对香菇菌丝的毒性实验 | 第34页 |
| ·农杆菌侵染时间对香菇转化效率的影响 | 第34页 |
| ·香菇和农杆菌共培养最适温度的确定 | 第34页 |
| ·香菇和农杆菌共培养最佳时间的确定 | 第34页 |
| ·诱导剂添加与否的影响 | 第34页 |
| ·农杆菌介导的香菇菌丝的转化 | 第34-35页 |
| ·香菇转化子的验证 | 第35-37页 |
| ·香菇基因组DNA的提取 | 第35页 |
| ·香菇转化子的PCR验证 | 第35-36页 |
| ·转化子的遗传稳定性验证 | 第36页 |
| ·转化子的southern blot验证 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-50页 |
| ·抗寒基因COR基因片段的序列分析 | 第37-40页 |
| ·抗寒白菜COR基因编码区的克隆 | 第37页 |
| ·COR基因的全长的获得和同源性分析 | 第37-39页 |
| ·COR编码氨基酸序列分析 | 第39-40页 |
| ·pcDNA3.1(+)-COR载体的构建 | 第40-42页 |
| ·pcDNA3.1(+)-COR载体构建图 | 第40-41页 |
| ·菌落PCR验证 | 第41-42页 |
| ·香菇双元表达载体pDHt/sk-hyg-COR的构建 | 第42-43页 |
| ·pDHt/sk-hyg-COR载体构建图 | 第42页 |
| ·香菇双元表达载体pDHt/sk-hyg-COR的验证 | 第42-43页 |
| ·香菇对潮霉素敏感性实验 | 第43-44页 |
| ·青霉素对香菇菌丝的毒性实验 | 第44页 |
| ·香菇和农杆菌共培养最适温度的确定 | 第44-45页 |
| ·香菇和农杆菌共培养最适温度的确定 | 第45页 |
| ·香菇和农杆菌共培养时间的确定 | 第45-46页 |
| ·诱导剂添加与否对于转化效率的影响 | 第46页 |
| ·农杆菌介导的香菇菌丝的转化 | 第46-47页 |
| ·香菇转化子的检测 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·启动子对于COR基因转化的影响 | 第48页 |
| ·香菇菌种W1的COR转化子遗传稳定 | 第48-49页 |
| ·双元载体pDHt/sk-hyg-COR可以用于其它食用菌的遗传转化 | 第49-50页 |
| 4 小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
