| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 1 绪论 | 第14-36页 |
| ·蜘蛛丝 | 第14-17页 |
| ·蜘蛛丝的构造及特性 | 第14-15页 |
| ·蜘蛛丝的相关研究 | 第15-16页 |
| ·蜘蛛丝蛋白基因及相关研究 | 第16-17页 |
| ·逆转录病毒载体 | 第17-19页 |
| ·逆转录病毒概述 | 第17-18页 |
| ·逆转录病毒载体的研究进展 | 第18-19页 |
| ·逆转录病毒载体的应用前景 | 第19页 |
| ·细胞培养 | 第19-24页 |
| ·细胞培养概述 | 第19-21页 |
| ·细胞系的建立 | 第21页 |
| ·细胞培养的条件 | 第21-24页 |
| ·细胞培养的应用与意义 | 第24页 |
| ·哺乳类动物的细胞核移植 | 第24-34页 |
| ·转基因克隆动物 | 第24-25页 |
| ·绵羊的同期发情与胚胎移植 | 第25-26页 |
| ·影响哺乳类动物核移植效率的因素 | 第26-32页 |
| ·哺乳动物的核移植研究概况 | 第32-34页 |
| ·研究的目的与意义 | 第34-36页 |
| 2 转基因绵羊成纤维细胞系的建立 | 第36-53页 |
| ·材料与方法 | 第36-38页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·实验试剂 | 第36-37页 |
| ·实验试剂的配制 | 第37-38页 |
| ·载体信息 | 第38页 |
| ·仪器设备 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-42页 |
| ·pcDNA3.1-丝蛋白真核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·pIRES2-EGFP丝蛋白真核表达载体的构建 | 第39页 |
| ·绵羊皮肤成纤维细胞的原代培养 | 第39-40页 |
| ·G418筛选浓度及DNA转染浓度的确定 | 第40页 |
| ·绵羊皮肤成纤维细胞的转染及筛选 | 第40-41页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因细胞系的鉴定 | 第41-42页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因细胞的冷冻保存 | 第42页 |
| ·冷冻转蜘蛛拖丝蛋白基因细胞的复苏与检测 | 第42页 |
| ·结果 | 第42-50页 |
| ·蜘蛛拖丝蛋白基因4S与pcDNA3.1表达载体的连接与鉴定 | 第42-43页 |
| ·pIRES2-EGFP-4S真核表达载体的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| ·绵羊皮肤成纤维细胞的原代培养及形态 | 第44-45页 |
| ·最适G418筛选及DNA转染浓度 | 第45-46页 |
| ·经G418筛选后的转基因细胞形态学观察 | 第46页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因细胞的生物学检测及PCR鉴定 | 第46-49页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因细胞冷冻复苏后的鉴定 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 3 转蜘蛛Spidroin1基因绵羊克隆胚核移植 | 第53-79页 |
| ·材料与方法 | 第53-56页 |
| ·仪器设备 | 第53-54页 |
| ·实验试剂 | 第54-55页 |
| ·试剂的配制 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-69页 |
| ·绵羊卵母细胞的获取 | 第56-57页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟 | 第57-60页 |
| ·绵羊成熟卵母细胞的孤雌激活 | 第60-61页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因供核细胞的准备 | 第61页 |
| ·成熟卵母细胞的去核、注核 | 第61-64页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因重构胚的融合-激活及体外培养 | 第64-66页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因重构胚的PCR鉴定 | 第66-67页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因核移植重构胚的移植 | 第67-69页 |
| ·数据统计 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-72页 |
| ·绵羊卵母细胞的获取 | 第69页 |
| ·绵羊卵母细胞的体外成熟 | 第69-70页 |
| ·成熟卵母细胞的孤雌激活 | 第70-71页 |
| ·成熟卵母细胞的去核、注核 | 第71页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因重构胚的融合-激活及其体外培养 | 第71-72页 |
| ·转蜘蛛拖丝蛋白基因重构胚的PCR鉴定 | 第72页 |
| ·受体母羊的同期发情与胚胎移植 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-78页 |
| ·不同因素对绵羊卵母细胞采集的影响 | 第72-74页 |
| ·不同因素对绵羊卵母细胞体外成熟的影响 | 第74-76页 |
| ·成熟卵母细胞的孤雌激活 | 第76-77页 |
| ·重构胚的融合-激活、体外培养及移植 | 第77-78页 |
| ·本章小结 | 第78-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-94页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
