| 名词简写 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| 1. 重组 | 第9-11页 |
| ·基因重组 | 第9页 |
| ·同源重组及不同生物中的基因重组 | 第9-11页 |
| 2 重组工程的研究进展 | 第11-16页 |
| ·重组工程及其原理 | 第11-12页 |
| ·重组工程的研究简史及发展概况 | 第12-13页 |
| ·重组工程介导的基因敲除研究进展 | 第13页 |
| ·无冗余碱基基因敲除研究概况 | 第13-14页 |
| ·重组工程的应用 | 第14-16页 |
| 第二章 同源臂长度对大肠杆菌基因敲除效率的影响 | 第16-35页 |
| 前言 | 第16页 |
| 第一节 同源臂长度40bp时大肠杆菌MG1655 LacZ基因的敲除 | 第16-26页 |
| 1. 实验材料 | 第16-19页 |
| ·质粒和菌种 | 第16-17页 |
| ·引物合成与测序 | 第17-18页 |
| ·培养基和缓冲液的配制 | 第18页 |
| ·主要工具酶及化学试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器设备及来源 | 第18-19页 |
| 2. 实验方法 | 第19-22页 |
| ·常规分子生物学操作方法 | 第19-21页 |
| ·LacZ基因敲除 | 第21-22页 |
| ·cTc诱导I-Sce I表达,去除抗性基因 | 第22页 |
| 3 实验结果 | 第22-25页 |
| ·大肠杆菌基因敲除的策略 | 第22-23页 |
| ·LacZ基因的敲除 | 第23-24页 |
| ·cTc诱导I-Sce I表达,去除抗性基因结果 | 第24-25页 |
| 4. 讨论 | 第25-26页 |
| 第二节 同源臂长度36bp,30bp,25bp,20bp时大肠杆菌MG1655 LacZ基因的敲除 | 第26-29页 |
| 1 实验材料 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-27页 |
| ·LacZ基因敲除 | 第26页 |
| ·cTc诱导I-SceI表达,去除抗性基因 | 第26-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-28页 |
| ·LacZ基因敲除结果 | 第27页 |
| ·cTc诱导I-SceI表达,去除抗性基因结果 | 第27-28页 |
| ·不同长度同源臂敲除效率的比较 | 第28页 |
| 4. 讨论 | 第28-29页 |
| 第三节 同源臂长度50bp时大肠杆菌W3110 nanA基因的敲除 | 第29-32页 |
| 1 实验材料 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-30页 |
| ·nanA基因敲除 | 第29页 |
| ·cTc诱导I-SceI表达,去除抗性基因 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-31页 |
| ·nanA基因敲除结果 | 第30页 |
| ·cTc诱导I-SceI表达,去除抗性基因结果 | 第30-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-32页 |
| 第四节 同源臂长度30bp时大肠杆菌W3110 nanA基因的敲除 | 第32-35页 |
| 1 实验材料 | 第32页 |
| 2 实验方法 | 第32-33页 |
| ·nanA基因敲除 | 第32页 |
| ·cTc诱导I-Sce I基因表达,去除抗性基因 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-34页 |
| ·nanA基因敲除结果 | 第33页 |
| ·cTc诱导I-Sce I表达,去除抗性基因 | 第33-34页 |
| ·不同长度同源臂基因敲除效率的比较 | 第34页 |
| 4. 讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 重组工程介导的大肠杆菌基因组定点突变 | 第35-45页 |
| 前言 | 第35-36页 |
| 第一节 大肠杆菌MG1655 LacZ基因的点突变 | 第36-41页 |
| 1 实验材料 | 第36-38页 |
| ·菌种和质粒 | 第36-37页 |
| ·引物合成与测序 | 第37页 |
| ·培养基和缓冲液的配制 | 第37页 |
| ·主要工具酶及化学试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器设备及来源 | 第37-38页 |
| 2 实验方法 | 第38-39页 |
| ·带有同源臂的S-neo-S基因盒的扩增 | 第38页 |
| ·LacZ基因的定点突变 | 第38页 |
| ·cTc诱导I-SceI表达,去除抗性基因 | 第38-39页 |
| 3. 实验结果 | 第39-41页 |
| ·LacZ基因点突变结果 | 第39页 |
| ·cTc诱导I-SceI表达,去除抗性基因结果 | 第39-41页 |
| 第二节 大肠杆菌MG1655 nanA基因的点突变 | 第41-45页 |
| 1 实验材料 | 第41页 |
| ·菌种和质粒 | 第41页 |
| ·引物及测序 | 第41页 |
| ·培养液和缓冲液的配制 | 第41页 |
| ·主要工具酶及化学试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器设备及来源 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-42页 |
| ·带有同源臂的S-neo-S基因盒的扩增 | 第41-42页 |
| ·nanA基因的定点突变 | 第42页 |
| ·cTc诱导I-SceI表达,去除抗性基因 | 第42页 |
| 3 实验结果 | 第42-45页 |
| ·nanA基因定点突变结果 | 第42-43页 |
| ·cTc诱导I-SceI表达,去除抗性基因结果 | 第43-45页 |
| 第四章 恶臭假单胞菌KT2440的重组工程法基因敲除 | 第45-52页 |
| 前言 | 第45页 |
| 1 实验材料 | 第45-47页 |
| ·菌种和质粒 | 第45-46页 |
| ·引物及测序 | 第46-47页 |
| ·培养基和缓冲液的配制 | 第47页 |
| ·主要工具酶及化学试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器设备及来源 | 第47页 |
| 2 实验方法 | 第47-48页 |
| ·常用生物学方法 | 第47页 |
| ·P.putida KT2440与重组酶诱导表达的P.putida KT2440/pLS512电转化感受态细胞的制备和DNA的转化 | 第47-48页 |
| 3. 实验结果 | 第48-50页 |
| ·P.putida KT2440基因敲除的策略 | 第48-49页 |
| ·PP_0589基因的敲除 | 第49页 |
| ·PP_1384-1388基因敲除 | 第49-50页 |
| ·PP_2064-2069基因敲除 | 第50页 |
| 4. 讨论 | 第50-52页 |
| 该技术的优缺点及创新之处 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
