| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一部分 文献综述 TTV 病毒的研究进展 | 第7-16页 |
| 1 研究概述 | 第7页 |
| 2 猪 TTSuV 的研究现状 | 第7-12页 |
| ·猪 TTSuV 的分型 | 第7-8页 |
| ·猪 TTSuV 的基因组结构 | 第8页 |
| ·TTV 的种属特异性 | 第8-9页 |
| ·猪 TTSuV 的流行情况 | 第9-10页 |
| ·TTSuV 的传播途径 | 第10-11页 |
| ·猪源 TTSuV 的致病性 | 第11-12页 |
| 3 实时荧光定量 PCR 方法简介 | 第12-15页 |
| ·实时荧光定量 PCR 方法概述 | 第12-13页 |
| ·Taqman 实时荧光定量 PCR 简介 | 第13-14页 |
| ·双重实时荧光定量 PCR 优点 | 第14-15页 |
| 4 研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| ·TTSuV 感染率调查的目的意义 | 第15页 |
| ·TTSuV 基因克隆的目的意义 | 第15-16页 |
| 第二部分 实验研究 | 第16-36页 |
| 1 实验材料 | 第16-17页 |
| ·材料 | 第16页 |
| ·主要试剂与材料 | 第16页 |
| ·实验样本 | 第16页 |
| ·实验仪器 | 第16-17页 |
| ·溶液和培养基 | 第17页 |
| 2 实验方法 | 第17-24页 |
| ·检测方法 | 第17-19页 |
| ·引物和探针 | 第17-18页 |
| ·反应体系 | 第18页 |
| ·反应程序 | 第18-19页 |
| ·TTSuV 的基因克隆 | 第19-24页 |
| ·实验样品 | 第19页 |
| ·引物设计 | 第19页 |
| ·普通 PCR 反应条件 | 第19-20页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞制备 | 第21页 |
| ·连接载体(pMD-18T) | 第21-22页 |
| ·回收 DNA 片段的克隆 | 第22页 |
| ·菌落 PCR 验证转化结果 | 第22页 |
| ·质粒抽提 | 第22-23页 |
| ·酶切 | 第23-24页 |
| 3 实验结果 | 第24-34页 |
| ·猪 TTSuV 双重荧光定量 PCR 结果 | 第24-29页 |
| ·荧光定量 PCR 扩增曲线与 C(t)值结果 | 第24-27页 |
| ·猪 TTSuV 感染率的调查结果 | 第27-29页 |
| ·TTSuV 的基因克隆实验结果 | 第29-34页 |
| ·普通 PCR 扩增电泳图 | 第29-30页 |
| ·普通 PCR 扩增菌落电泳图 | 第30页 |
| ·质粒双酶切验证电泳图 | 第30-31页 |
| ·测序结果 | 第31页 |
| ·TTSuV1-D 基因序列的分析与系统进化树分析 | 第31-32页 |
| ·TTSuV2-S 基因序列的分析与系统进化树分析 | 第32-34页 |
| 4 分析与讨论 | 第34-36页 |
| 5 结论 | 第36页 |
| 下一步工作 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-42页 |
| 附录 | 第42页 |