红麻花药和花瓣抑制消减杂交文库的构建及EST序列的分析
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| ·花药和花粉的发育 | 第11页 |
| ·基因差异表达的研究方法 | 第11-17页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第12-13页 |
| ·cDNA-AFLP技术 | 第13页 |
| ·抑制消减杂交 | 第13-16页 |
| ·基因芯片技术 | 第16-17页 |
| ·序列表达标签(EST)的原理及应用 | 第17-18页 |
| ·EST技术 | 第17页 |
| ·EST的原理和研究方法 | 第17-18页 |
| ·EST数据库及应用 | 第18页 |
| ·生物信息学在EST分析中的应用 | 第18-20页 |
| ·生物信息学及EST的应用 | 第18-19页 |
| ·利用生物信息学分析EST序列 | 第19-20页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-36页 |
| ·材料、试剂及仪器 | 第21页 |
| ·菌株和载体 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-36页 |
| ·总RNA提取 | 第22-23页 |
| ·mRNA的提取 | 第23-24页 |
| ·SSH文库的构建 | 第24-33页 |
| ·阳性克隆测序及EST序列分析 | 第33-34页 |
| ·部分特异基因的半定量验证 | 第34-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-73页 |
| ·红麻花药和花瓣总RNA提取结果 | 第36-37页 |
| ·mRNA的纯化检测 | 第37-38页 |
| ·cDNA合成和酶切质量检测 | 第38-39页 |
| ·两次PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·差减效率检测 | 第40-41页 |
| ·PCR产物回收纯化结果 | 第41-42页 |
| ·文库插入片段的检测 | 第42-43页 |
| ·阳性克隆测序及EST序列分析 | 第43-73页 |
| ·cDNA序列测定结果 | 第43-44页 |
| ·有效EST序列的获得 | 第44-46页 |
| ·EST序列的聚类和拼接 | 第46页 |
| ·Unigene表达丰度分析 | 第46-48页 |
| ·与GenBank数据库比对结果和功能注释 | 第48-73页 |
| ·部分差异片段RT-PCR验证 | 第73页 |
| 4 小结与讨论 | 第73-82页 |
| ·RNA的提取和mRNA的纯化 | 第73-74页 |
| ·抑制消减杂交中的相关问题 | 第74-75页 |
| ·EST序列分析 | 第75-76页 |
| ·红麻花药差异性基因功能分类 | 第76-79页 |
| ·具有催化活性的功能蛋白 | 第76-77页 |
| ·结合功能蛋白 | 第77-78页 |
| ·转运活性蛋白 | 第78页 |
| ·转录调控蛋白 | 第78页 |
| ·营养库活性蛋白 | 第78页 |
| ·结构分子活性蛋白 | 第78-79页 |
| ·与花药发育相关的组织特异性基因 | 第79-81页 |
| ·差异片段的RT-PCR分析 | 第81-82页 |
| 5 结论 | 第82-83页 |
| 6 问题与展望 | 第83-85页 |
| ·存在的不足 | 第83-84页 |
| ·展望 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
