| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| ·石斑鱼简介 | 第10页 |
| ·石斑鱼虹彩病毒简介 | 第10-11页 |
| ·石斑鱼免疫相关基因的研究进展 | 第11-12页 |
| ·鱼类凝集素的研究进展和免疫功能 | 第12-15页 |
| ·硫氧还蛋白及其相关蛋白的研究进展 | 第15-17页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 斜带石斑鱼类C型凝集素蛋白的原核表达、纯化及功能分析 | 第19-44页 |
| 前言 | 第19页 |
| ·实验材料 | 第19-24页 |
| ·细胞 | 第19页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·质粒载体和受体菌株 | 第19-21页 |
| ·细菌培养基 | 第21页 |
| ·限制性核酸内切酶及其他工具酶 | 第21页 |
| ·试剂盒 | 第21-22页 |
| ·蛋白电泳所用溶液 | 第22页 |
| ·Western blot所用溶液和试剂 | 第22-23页 |
| ·融合蛋白纯化所用溶液和试剂 | 第23页 |
| ·免疫佐剂 | 第23页 |
| ·其他溶液和试剂 | 第23页 |
| ·常用的生物信息学分析软件和网站 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-34页 |
| ·石斑鱼饲养及鱼体组织样品采集 | 第24页 |
| ·总RNA提取 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·5'-和3'-RACE及基因ORF序列扩增 | 第25-28页 |
| ·cDNA模板第一链的合成 | 第25-26页 |
| ·Rapid Amplification of cDNA Ends(RACE)扩增cDNA序列 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第27页 |
| ·T-载体的连接 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·菌液PCR筛选阳性克隆 | 第28页 |
| ·pmal-c2x原核表达重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·PCR产物的纯化与回收 | 第28页 |
| ·从质粒载体菌DH5α中提取质粒pmal-c2X | 第28-29页 |
| ·PCR产物和载体质粒的双酶切及纯化 | 第29页 |
| ·PCR产物连入质粒载体 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第29页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·目的基因在BL21(DE3)中的诱导表达 | 第29页 |
| ·重组菌体的超声破碎 | 第29页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第29-30页 |
| ·蛋白纯化 | 第30页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第30页 |
| ·重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第30-31页 |
| ·免疫小白鼠 | 第30页 |
| ·抗血清的收集制备 | 第30-31页 |
| ·Western-Blot检测抗血清的识别特异性 | 第31页 |
| ·半定量PCR/实时荧光定量PCR检测mRNA表达谱 | 第31-32页 |
| ·组织总RNA提取 | 第31页 |
| ·cDNA一链合成 | 第31页 |
| ·半定量检测各基因的组织分布 | 第31-32页 |
| ·Real-time quantitiative PCR(RT-qPCR) | 第32页 |
| ·细胞内定位分析 | 第32-33页 |
| ·稳定细胞系筛选 | 第33页 |
| ·体外耐寒活性实验 | 第33页 |
| ·不同温度刺激后检测mRNA表达量 | 第33-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-42页 |
| ·Ec-CTLP cDNA全长扩增和序列分析 | 第34-35页 |
| ·Ec-CTLP氨基酸序列的同源性分析和进化关系 | 第35-37页 |
| ·Ec-CTLP在健康鱼体内的组织分布以及不同温度刺激GS细胞后的表达量变化 | 第37-38页 |
| ·Ec-CTLP的原核表达和抗体制备 | 第38-39页 |
| ·Ec-CTLP原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·Ec-CTLP重组蛋白的表达与纯化 | 第39页 |
| ·抗体制备和检测 | 第39页 |
| ·石斑鱼Ec-CTLP的胞内定位分析 | 第39-41页 |
| ·石斑鱼重组Ec-CTLP的体外耐寒活性 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第三章 斜带石斑鱼硫氧还蛋白家族Txndc 12的原核表达、纯化和功能分析 | 第44-57页 |
| 前言 | 第44页 |
| ·实验材料 | 第44-46页 |
| ·实验动物、细胞和病毒 | 第44页 |
| ·质粒载体和受体菌株 | 第44页 |
| ·其他材料和工具 | 第44-45页 |
| ·实验所用酶和试剂盒 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·石斑鱼饲养、SGIV病毒感染及鱼体组织样品采集 | 第46页 |
| ·总RNA的提取 | 第46页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·cDNA全长的扩增 | 第46页 |
| ·pGEX-4T-1原核表达质粒的构建与重组载体的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·胰岛素二硫还原的比浊法实验 | 第47页 |
| ·rEc-Txndc12对SGIV感染的保护作用 | 第47-48页 |
| ·实验结果 | 第48-55页 |
| ·Ec-Txndc12的克隆和序列分析 | 第48-49页 |
| ·Ec-Txndc12同源性和进化树分析 | 第49-51页 |
| ·rEc-Txndc12融合蛋白的生物测定 | 第51-53页 |
| ·Ec-Txndc12的组织分布 | 第53-54页 |
| ·SGIV刺激后石斑鱼Ec-Txndc12转录组的表达模式 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 全文总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-67页 |
| 缩略词 | 第67-69页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第69-70页 |
| 攻读硕士期间参加的学术交流活动 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
