| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词(ABBREVIATION) | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-16页 |
| ·锦鲤疱疹病毒(KOI HERPESVIRUS,KHV)病原学 | 第11-12页 |
| ·KHV的发现与流行 | 第11页 |
| ·KHV的生物学特征和分类地位 | 第11-12页 |
| ·KHV的流行病学与危害 | 第12页 |
| ·临床症状 | 第12页 |
| ·KHV的诊断方法 | 第12-14页 |
| ·常规临床诊断 | 第12页 |
| ·细胞分离培养检测 | 第12-13页 |
| ·分子生物学检测 | 第13-14页 |
| ·胸苷激酶基因(Thymidine Kinase,TK) | 第13页 |
| ·主要囊膜蛋白基因(Major envelop protein,MEP) | 第13-14页 |
| ·其他基因 | 第14页 |
| ·其他方法 | 第14页 |
| ·原核表达系统 | 第14-15页 |
| ·简介 | 第14-15页 |
| ·原核表达系统在水产方面的应用 | 第15页 |
| ·研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 第二章 锦鲤疱疹病毒(KOI HERPESVIRUS,KHV)ORF72基因和TK基因的克隆 | 第16-29页 |
| ·材料与方法 | 第16-25页 |
| ·毒株 | 第16页 |
| ·菌种和质粒 | 第16页 |
| ·实验试剂 | 第16-18页 |
| ·抗生素 | 第18页 |
| ·缓冲液 | 第18-19页 |
| ·其它试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·KHV核酸的提取 | 第20-21页 |
| ·引物的设计与合成 | 第21页 |
| ·KHV ORF72和ORF55基因的扩增 | 第21页 |
| ·PCR产物的电泳检测和回收 | 第21-23页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第21-22页 |
| ·电泳产物回收 | 第22-23页 |
| ·PCR产物和质粒载体的酶切与产物回收纯化和连接 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23-24页 |
| ·质粒的制备和鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组表达质粒的提取 | 第24-25页 |
| ·重组表达质粒的PCR鉴定 | 第25页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·重组表达质粒的序列测定 | 第25页 |
| ·结果和分析 | 第25-27页 |
| ·ORF72和TK基因的扩增结果 | 第25-26页 |
| ·酶切测序鉴定重组质粒 | 第26-27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 PGEX-4T_1-TK和PET28A-ORF72蛋白的诱导表达、纯化和多克隆抗体制备 | 第29-39页 |
| ·材料与方法 | 第29-34页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第29页 |
| ·Western blot试剂 | 第29-30页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第30页 |
| ·其他试剂 | 第30页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第30页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第30-32页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第32页 |
| ·含胍样品进行SDS-PAGE电泳前的处理 | 第32-33页 |
| ·纯化蛋白的蛋白含量测定 | 第33页 |
| ·纯化蛋白的电泳检测 | 第33页 |
| ·westemb—blotting检测分析(Anti-His,Anti-GST) | 第33-34页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第34页 |
| ·结果和分析 | 第34-37页 |
| ·pGEX-4T_1-TK和pET28a-ORF72的诱导表达 | 第34-36页 |
| ·pET28a-ORF72纯化和蛋白含量测定 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 ORF72兔多克隆抗体的特性鉴定 | 第39-47页 |
| ·材料与方法 | 第39-41页 |
| ·ELISA用试剂 | 第39-40页 |
| ·其他 | 第40页 |
| ·效价检测 | 第40页 |
| ·免疫酶斑点实验 | 第40页 |
| ·Western Blot | 第40页 |
| ·免疫荧光 | 第40-41页 |
| ·结果和分析 | 第41-45页 |
| ·兔多克隆抗体效价测定 | 第41页 |
| ·Western-blot分析 | 第41-43页 |
| ·免疫酶斑点实验 | 第43-44页 |
| ·免疫荧光 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-54页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第54页 |
