苏云金芽胞杆菌A1菌株的研究和高效工程菌的构建
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| 1 苏云金芽胞杆菌的生物学特性及分布 | 第11-12页 |
| 2 苏云金芽胞杆菌研究历史 | 第12-13页 |
| 3 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白及其基因 | 第13-19页 |
| ·伴胞晶体蛋白 | 第13-17页 |
| ·ICPs的结构分析 | 第14-15页 |
| ·杀虫晶体蛋白的作用机理 | 第15-16页 |
| ·杀虫晶体蛋白的协同增效 | 第16-17页 |
| ·BT杀虫晶体蛋白基因 | 第17-19页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因的分类 | 第17-18页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因的鉴定 | 第18-19页 |
| 4 BT工程菌的研究及应用 | 第19-23页 |
| ·拓宽杀虫谱构建广谱BT工程菌 | 第20页 |
| ·提高毒力构建高效表达的BT工程菌 | 第20-21页 |
| ·改造ICPs基因的启动子 | 第20-21页 |
| ·增加ICPs基因拷贝数 | 第21页 |
| ·通过辅助蛋自增效作用 | 第21页 |
| ·提高稳定性 | 第21-22页 |
| ·延缓抗性的产生 | 第22页 |
| ·延长残效期工程菌 | 第22-23页 |
| 5 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 菌株A1的生物学特性研究 | 第24-36页 |
| 1 材料与方法 | 第24-30页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·菌株 | 第24页 |
| ·仪器设备 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·酶与生化试剂 | 第26-27页 |
| ·研究方法 | 第27-30页 |
| ·形态特征和晶体观察 | 第27页 |
| ·培养特征分析 | 第27页 |
| ·鞭毛观察 | 第27页 |
| ·A1牛长曲线测定 | 第27-28页 |
| ·Bt总DNA的提取 | 第28页 |
| ·Taq DNA聚合酶反应体系 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及DNA回收测序 | 第29页 |
| ·Bt菌株A1杀虫晶体蛋白SDS-PAGE分析 | 第29-30页 |
| ·室内杀虫活性测定 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-34页 |
| ·菌株的鉴定 | 第30-32页 |
| ·形态特征与晶体观察 | 第30-31页 |
| ·鞭毛观察 | 第31-32页 |
| ·A1菌株在不同培养基上的生长特征观察 | 第32页 |
| ·生长曲线 | 第32-33页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因的鉴定 | 第33页 |
| ·杀虫晶体蛋白分析 | 第33-34页 |
| ·A1菌株的生物活性测定 | 第34页 |
| 3 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 菌株A1杀虫蛋白基因的克隆及工程菌的构建 | 第36-55页 |
| 1 材料与方法 | 第36-43页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌株与质粒 | 第36-37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·研究方法 | 第37-43页 |
| ·分子生物学操作 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆的筛选(α-互补筛选) | 第38页 |
| ·质粒提取 | 第38页 |
| ·全长基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·基因的穿梭表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·Bt电击感受态细胞的制备与电击转化 | 第41页 |
| ·基因表达 | 第41-42页 |
| ·工程菌株的构建 | 第42页 |
| ·工程菌的扫描电镜检测 | 第42页 |
| ·工程菌的SDS-PAGE检测 | 第42页 |
| ·工程菌中质粒的遗传稳定性 | 第42-43页 |
| ·工程菌株的生物活性测定 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-53页 |
| ·杀虫晶体蛋白基因全长序列的克隆与分析 | 第43页 |
| ·基因表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·穿梭表达载体的构建 | 第44页 |
| ·基因的表达 | 第44-47页 |
| ·基因在大肠杆菌中的表达 | 第44-45页 |
| ·基因在无晶体突变株中表达 | 第45-47页 |
| ·工程菌的构建 | 第47-51页 |
| ·工程菌的遗传稳定性 | 第51-52页 |
| ·工程菌株生物活性测定 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
