| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-34页 |
| ·植原体的研究概况 | 第11-24页 |
| ·植原体的基本特征和发现 | 第11页 |
| ·植原体的危害、分布与传播 | 第11-12页 |
| ·植原体的寄主专化性 | 第12-13页 |
| ·植原体基因组 | 第13-14页 |
| ·植原体的检测 | 第14-16页 |
| ·植原体的分类 | 第16-21页 |
| ·相关植原体病害研究进展 | 第21-24页 |
| ·植原体寄主的组织培养研究 | 第24-26页 |
| ·植原体组织培养的研究背景 | 第24页 |
| ·植原体组织培养存在的问题 | 第24-25页 |
| ·植原体组织培养的目的和意义 | 第25页 |
| ·植原体组织培养的展望 | 第25页 |
| ·植原体资源的保存 | 第25-26页 |
| ·植原体膜蛋白的研究 | 第26-31页 |
| ·植原体的免疫膜蛋白及其分类 | 第26-29页 |
| ·Sec 系统膜蛋白 | 第29-30页 |
| ·植原体膜蛋白的应用 | 第30-31页 |
| ·研究的目的意义和技术路线 | 第31-34页 |
| 2 七种植原体病害多位点基因分子鉴定 | 第34-60页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·材料来源 | 第34页 |
| ·主要试剂材料 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-39页 |
| ·感病植株总 DNA 提取 | 第34-35页 |
| ·引物合成 | 第35页 |
| ·PCR 扩增体系 | 第35-36页 |
| ·PCR 产物的割胶纯化 | 第36页 |
| ·连接 | 第36-37页 |
| ·感受态细胞制备 | 第37页 |
| ·转化与克隆 | 第37-38页 |
| ·数据分析 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-57页 |
| ·七种植原体症状表现 | 第39-42页 |
| ·植原体在电子显微镜下形态观察 | 第42-43页 |
| ·七种植原体基因扩增结果 | 第43-44页 |
| ·七种植原体的 16SrDNA 的序列分析及基于系统进化树的分析 | 第44-51页 |
| ·七种植原体的 rp 基因序列的分析及基于系统进化树的分析 | 第51-54页 |
| ·七种植原体的 secY 基因的序列分析及基于系统进化树的分析 | 第54-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·关于多位点序列分析的讨论 | 第57页 |
| ·关于云南元谋地区植原体病害分子鉴定的讨论 | 第57-58页 |
| ·关于不同地区相同寄主植原体的讨论 | 第58页 |
| ·关于云南元谋地区植原体的分布情况 | 第58-60页 |
| 3 免疫膜蛋白初步研究 | 第60-75页 |
| ·材料与方法 | 第60-61页 |
| ·植原体材料 | 第60页 |
| ·菌株、载体和主要试剂 | 第60-61页 |
| ·方法 | 第61-66页 |
| ·引物设计 | 第61页 |
| ·PCR 扩增体系 | 第61-62页 |
| ·PCR 产物的割胶纯化 | 第62页 |
| ·产物的加 A，连接，转化及克隆测序 | 第62页 |
| ·质粒提取 | 第62-63页 |
| ·pMD19-T 重组克隆的筛选 | 第63页 |
| ·原核表达载体的构建策略 | 第63-64页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·重组基因的原核表达 | 第65-66页 |
| ·结果与分析 | 第66-72页 |
| ·扩增结果 | 第66-67页 |
| ·免疫膜蛋白的同源性分析 | 第67页 |
| ·Imp 蛋白特性分析及空间结构预测 | 第67-71页 |
| ·PnWB 和 ParVP 的 Imp 原核表达重组质粒的酶切鉴定 | 第71-72页 |
| ·PnWB 和 ParVP 的 IMP 原核表达 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| ·免疫膜蛋白 Type I 新类型 | 第72-73页 |
| ·免疫膜蛋白和 16S rDNA 的相关性 | 第73页 |
| ·植原体膜蛋白的多样性及其功能 | 第73-74页 |
| ·膜蛋白基因重组质粒的表达 | 第74-75页 |
| 4 植原体共生植株的保存研究 | 第75-86页 |
| ·实验材料 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-77页 |
| ·外植体的灭菌与接种 | 第75页 |
| ·初代培养和继代培养 | 第75-76页 |
| ·培养条件 | 第76页 |
| ·营养繁殖体的低温保存 | 第76页 |
| ·组培苗植原体的分子检测 | 第76页 |
| ·实验数据处理和分析 | 第76-77页 |
| ·结果与分析 | 第77-83页 |
| ·花椰菜丛枝植原体共生植株的培养结果 | 第77-80页 |
| ·蟹爪兰丛枝植原体组织培养的观察结果 | 第80-83页 |
| ·组培苗分子检测结果 | 第83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| ·组织培养中存在的污染、褐化、黄化和玻璃化问题 | 第83-84页 |
| ·花椰菜丛枝植原体共生植株的培养以及冷藏保存 | 第84页 |
| ·蟹爪兰丛枝植原体共生植株的培养以及冷藏保存 | 第84-85页 |
| ·植原体共生植株的培养 | 第85-86页 |
| 5 结论和展望 | 第86-88页 |
| ·结论 | 第86页 |
| ·分子生物学方法鉴定了云南元谋地区七个植原体株系 | 第86页 |
| ·对两种植原体株系的 IMP 蛋白进行了表达 | 第86页 |
| ·保存了花椰菜植原体共生植株和蟹爪兰植原体共生植株 | 第86页 |
| ·本研究创新点 | 第86-87页 |
| ·展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 附录 1 常用的化学试剂量、分子生物试剂和仪器 | 第97-98页 |
| 附录 2 常用试剂的配制 | 第98-99页 |
| 附录 3 缩略词 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100页 |
