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水稻OsSTSL1基因的克隆及功能研究

摘要第1-11页
ABSTRACT第11-13页
缩略词表第13-14页
第一章 引言第14-30页
 1 ABA研究进展第14-16页
   ·ABA在生长和发育中的作用第14-16页
     ·ABA在植物正常生长条件下的作用第14-15页
     ·ABA在植物胁迫条件下的作用第15-16页
 2 ABA信号转导途径第16-19页
   ·ABA受体PYR/PYL/RCAR蛋白家族第16-17页
   ·PP2C磷酸酶蛋白家族第17-18页
   ·SnRK2激酶蛋白家族第18-19页
   ·ABA信号转导途径第19页
 3 NaCl为代表的盐害第19-25页
   ·盐胁迫的危害第20-21页
     ·生理干旱第20页
     ·离子胁迫第20页
     ·代谢失调第20-21页
     ·ROS伤害第21页
     ·光合作用下降第21页
     ·影响呼吸作用第21页
   ·植物的盐适应及其调控机制第21-23页
     ·渗透调节第21-22页
     ·离子区域化第22-23页
     ·活性氧代谢及抗氧化防御系统第23页
   ·SOS信号通路第23-25页
     ·SOS信号通路简介第24-25页
 4 WD40蛋白研究进展第25-27页
   ·WD40基本结构域第25-26页
   ·WD40参与植物生长及胁迫响应第26-27页
 5 水稻中ABA信号转导途径第27-28页
 6 水稻中SOS信号通路第28-29页
 7 WD40参与水稻对胁迫的响应第29-30页
第二章 研究目的与意义第30-32页
第三章 实验材料与方法第32-51页
 1 实验材料第32-33页
   ·植物材料第32页
   ·材料种植第32-33页
     ·水稻种植第32页
     ·拟南芥种植第32-33页
   ·菌株第33页
 2 实验方法第33-51页
   ·生物信息学工具第33页
   ·基因表达检测第33-35页
     ·qRT-PCR检测OsSTSL1响应ABA及NaCl处理的表达模式第33-35页
       ·取材第33页
       ·提取RNA所用材料及试剂第33-34页
       ·提取RNA的方法第34页
       ·逆转录方法第34页
       ·qRT-PCR反应第34-35页
   ·植物表达载体的构建及转化第35-44页
     ·CTAB法提取水稻基因组DNA第37-38页
     ·RNA提取及逆转录第38页
     ·PCR扩增、克隆和测序第38-42页
       ·PCR扩增第38-39页
       ·琼脂糖凝胶电泳第39页
       ·DNA片段纯化第39页
       ·连接反应第39-40页
       ·E.coli感受态细胞的制备第40页
       ·转化E.coli感受态细胞第40页
       ·重组克隆的筛选与测序第40-41页
       ·质粒提取方法第41-42页
       ·植物表达载体的构建第42页
     ·农杆菌介导的拟南芥转化第42-44页
       ·农杆菌感受态的制备第42-43页
       ·农杆菌的转化第43页
       ·蘸花法转化拟南芥第43-44页
       ·转基因拟南芥纯合株系的筛选第44页
   ·Pro::GUS的组织化学鉴定第44-45页
     ·染色方法第45页
     ·脱色方法第45页
   ·GFP亚细胞定位第45-46页
     ·烟草瞬时转化检测基因亚细胞定位第45-46页
     ·拟南芥稳定转化检测基因亚细胞定位第46页
   ·OsSTSL1过表达纯合株系的ABA及NaCl处理第46-47页
     ·材料第46页
     ·处理方法第46-47页
       ·ABA/NaCl培养基上的直接萌发第46页
       ·ABA/NaCl培养基上的移苗处理第46-47页
       ·萌发率和转绿的统计第47页
       ·干旱处理第47页
   ·BiFC(Bimolecular fluorescence complementation)第47-51页
     ·Gatway技术原理第48-49页
     ·BiFC载体构建第49-50页
     ·BiFC验证OsSTSL1和OsABI2相互作用第50-51页
第四章 实验结果第51-77页
 1 OsSTSL1基因的获得和相关生物信息学分析第51-54页
 2 基因表达检测第54-56页
   ·qRT-PCR检测OsSTSL1基因的表达模式第54-56页
 3 OsSTSL1基因的组织化学染色分析第56-58页
 4 OsSTSL1蛋白的亚细胞定位第58-60页
 5 OsSTSL1过表达拟南芥植株获得和表型分析第60-72页
   ·过表达OsSTSL1拟南芥纯合植株萌发对ABA的响应第61-62页
   ·过表达OsSTSL1拟南芥纯合植株转绿对ABA的响应第62-64页
   ·过表达OsSTSL1拟南芥纯合植株主根长度对ABA的响应第64-66页
   ·过表达OsSTSL1拟南芥纯合植株萌发对NaCl的响应第66-67页
   ·过表达OsSTSL1拟南芥纯合植株转绿对NaCl的响应第67-69页
   ·过表达OsSTSL1拟南芥纯合植株主根长度对NaCl的响应第69-71页
   ·OsSTSL1在干旱胁迫中的功能第71-72页
 6 OsSTSL1和OsABI2相互作用验证第72-77页
第五章 讨论与结论第77-82页
 1 OsSTSL1是水稻中响应ABA的新基因第77-78页
 2 OsSTSL1在特定时期参与对NaCl的响应第78页
 3 OsSTSL1参与干旱胁迫响应可能的机制第78-79页
 4 OsSTSL1与STS1功能及作用机制的比较与探讨第79-81页
 5 结论第81-82页
参考文献第82-92页
致谢第92-93页

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