地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白的发酵工艺与应用技术研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 前言 | 第10-29页 |
| 一、芽孢杆菌及其代谢产物的生防作用 | 第10-20页 |
| (一) 芽孢杆菌类生防菌种类 | 第10-13页 |
| (二) 生防原理 | 第13-15页 |
| (三) 芽孢杆菌的抗菌物质 | 第15-17页 |
| 1、蛋白类 | 第15-16页 |
| 2、细菌素 | 第16页 |
| 3、抗生素 | 第16-17页 |
| (四) 抗菌蛋白纯化与测定方法 | 第17-20页 |
| 1、纯化方法 | 第17-19页 |
| 2、抗菌蛋白测定方法 | 第19-20页 |
| 二、微生物发酵工艺优化 | 第20-25页 |
| (一) 培养基优化 | 第20-21页 |
| 1、碳源 | 第20-21页 |
| 2、氮源 | 第21页 |
| 3、无机盐 | 第21页 |
| 4、生长因子 | 第21页 |
| (二) 条件优化 | 第21-25页 |
| 1、温度 | 第22页 |
| 2、pH值 | 第22-23页 |
| 3、溶解氧 | 第23-24页 |
| 4、接种量 | 第24页 |
| 5、消泡剂 | 第24页 |
| 6、发酵方式 | 第24-25页 |
| 三、优化方法 | 第25-27页 |
| (一) 正交试验设计法 | 第25页 |
| (二) 均匀设计法 | 第25-26页 |
| (三) 响应曲面法 | 第26-27页 |
| 四、本研究目的和意义 | 第27-29页 |
| 材料与方法 | 第29-38页 |
| 一、供试植物 | 第29页 |
| 二、试验菌株 | 第29页 |
| 三、培养基 | 第29页 |
| (一) 真菌培养基 | 第29页 |
| (二) 细菌培养基 | 第29页 |
| 四、试剂和仪器 | 第29-30页 |
| (一) 主要试剂 | 第29页 |
| (二) 主要仪器 | 第29-30页 |
| 五、细菌浓度测定方法 | 第30页 |
| 六、抗菌蛋白提取和测定 | 第30-31页 |
| (一) 提取方法 | 第30页 |
| 1、硫酸铵盐析 | 第30页 |
| 2、脱盐 | 第30页 |
| (二) 浓度测定方法 | 第30-31页 |
| (三) 活性测定方法 | 第31页 |
| 七、培养基优化方法 | 第31-33页 |
| (一) 单因子筛选 | 第31-32页 |
| 1、碳源筛选 | 第31页 |
| 2、有机氮源筛选 | 第31-32页 |
| 3、无机氮源筛选 | 第32页 |
| 4、金属离子筛选 | 第32页 |
| (二) 响应曲面优化方法 | 第32-33页 |
| 1、plaekett-Burman实验 | 第32页 |
| 2、最陡爬坡实验 | 第32-33页 |
| 3、中心组合实验 | 第33页 |
| 八、发酵条件 | 第33-34页 |
| (一) 对种子菌生长的影响 | 第33页 |
| (二) 对发酵产物的影响 | 第33-34页 |
| 1、温度 | 第33页 |
| 2、溶氧水平 | 第33-34页 |
| 3、补料 | 第34页 |
| 4、消泡剂 | 第34页 |
| 5、其它因子 | 第34页 |
| 九、抗菌蛋白与化学药剂复配试验 | 第34-35页 |
| (一) 试验药剂 | 第34页 |
| (二) 试验方法 | 第34-35页 |
| (三) 计算方法 | 第35页 |
| 十、抗菌蛋白防病试验 | 第35-38页 |
| (一) 离体试验 | 第35-36页 |
| 1、病菌接种方法 | 第35页 |
| 2、使用时间试验 | 第35页 |
| 3、其他防病试验 | 第35页 |
| 4、严重度分级标准 | 第35-36页 |
| (二) 小区试验 | 第36-37页 |
| 1、试验药剂及其剂量 | 第36页 |
| 2、试验方法 | 第36页 |
| 3、严重度分级标准 | 第36-37页 |
| 4、计算方法 | 第37页 |
| (三) 大田示范 | 第37-38页 |
| 结果与分析 | 第38-64页 |
| 一、种子菌生长的条件 | 第38-40页 |
| (一) 培养温度 | 第38页 |
| (二) 培养液初始pH | 第38-39页 |
| (三) 装液量 | 第39页 |
| (四) 转速 | 第39-40页 |
| 二、培养基优化 | 第40-51页 |
| (一) 培养基组分筛选 | 第40-43页 |
| 1、碳源种类 | 第40-41页 |
| 2、有机氮源种类 | 第41-42页 |
| 3、无机氮源种类 | 第42页 |
| 4、金属离子 | 第42-43页 |
| (二) 培养基优化 | 第43-51页 |
| 1、主效因子筛选 | 第43-44页 |
| 2、主效因子中心浓度确定 | 第44-45页 |
| 3、中心组合实验 | 第45-51页 |
| 4、验证性试验 | 第51页 |
| 三、发酵条件 | 第51-58页 |
| (一) 种子菌菌龄 | 第51-52页 |
| 1、W10生长曲线 | 第51-52页 |
| 2、菌龄 | 第52页 |
| (二) 发酵时间 | 第52-53页 |
| (三) 接种量 | 第53页 |
| (四) 发酵温度 | 第53-55页 |
| 1、最适温度 | 第53-54页 |
| 2、变温发酵 | 第54-55页 |
| (五) 发酵液pH | 第55页 |
| (六) 溶氧水平 | 第55-56页 |
| (七) 补料发酵 | 第56页 |
| (八) 消泡剂种类及其浓度 | 第56-57页 |
| (九) 发酵体系集成与效果 | 第57-58页 |
| 四、抗菌蛋白对灰霉病的防治试验 | 第58-64页 |
| (一) 使用技术 | 第58-62页 |
| 1、抗菌蛋白与化学药剂的复配增效作用 | 第58-59页 |
| 2、使用时间 | 第59-60页 |
| 3、使用浓度 | 第60-61页 |
| 4、使用次数 | 第61页 |
| 5、不同温度下的防效 | 第61-62页 |
| (二) 试验示范 | 第62-64页 |
| 1、小区防病试验 | 第62-63页 |
| 2、大田示范 | 第63-64页 |
| 小结与讨论 | 第64-67页 |
| 一、小结 | 第64页 |
| 二、讨论 | 第64-67页 |
| (一) 种子菌培养条件 | 第64页 |
| (二) 培养基优化 | 第64-65页 |
| (三) 发酵条件优化 | 第65-66页 |
| (四) 抗菌蛋白防病技术 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-82页 |
| 附录 | 第82-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
