| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-35页 |
| 第一章 牦牛及犏牛雄性不育的研究概况 | 第13-23页 |
| 1 我国牦牛资源及其遗传改良 | 第13-14页 |
| ·牦牛资源概况 | 第13页 |
| ·牦牛的遗传改良 | 第13-14页 |
| 2 犏牛雄性不育的研究 | 第14-19页 |
| ·细胞遗传学的研究 | 第14-15页 |
| ·组织形态学的研究 | 第15-16页 |
| ·生化遗传学研究 | 第16页 |
| ·生殖内分泌学的研究 | 第16-17页 |
| ·BOULE基因的研究进展 | 第17-19页 |
| 参考文献 | 第19-23页 |
| 第二章 选择性剪接体的研究进展 | 第23-31页 |
| 1 选择性剪接的机制 | 第23-26页 |
| ·RNA的剪接 | 第23-24页 |
| ·RNA的选择性剪接 | 第24-26页 |
| 2 选择性剪接的调节机制 | 第26-29页 |
| ·mRNA剪接位点的选择 | 第26页 |
| ·调控选择性剪接的途径 | 第26-29页 |
| ·信号传导途径调节选择性剪接 | 第26-27页 |
| ·PTB/hnRNP调节选择性剪接 | 第27页 |
| ·GC-AG型内含子的剪接 | 第27-28页 |
| ·多因素调节选择性剪接 | 第28页 |
| ·mRNA选择性剪接与疾病 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-31页 |
| 第三章 DNA甲基化及其检测方法研究进展 | 第31-35页 |
| 1 DNA甲基化与CPG岛 | 第31-32页 |
| 2 DNA甲基化检测的目的和意义 | 第32页 |
| 3 DNA甲基化的研究方法 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-35页 |
| 第二部分 试验部分 | 第35-71页 |
| 第四章 牦牛睾丸组织中BOULE基因选择性剪接体的筛选、鉴定及序列分析 | 第35-57页 |
| 1 材料与方法 | 第35-43页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第35-36页 |
| ·试剂 | 第35-36页 |
| ·仪器 | 第36页 |
| ·组织总RNA提取和反转录 | 第36-37页 |
| ·组织总RNA提取 | 第36-37页 |
| ·反转录过程 | 第37页 |
| ·引物设计与合成 | 第37-38页 |
| ·RT-PCR反应和产物回收 | 第38-40页 |
| ·RT-PCR反应 | 第38页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第38-39页 |
| ·目的片段回收 | 第39-40页 |
| ·将目的片段连接到pMD19-T Vector上(TA克隆) | 第40-42页 |
| ·PCR产物与pMD19-T Vector连接反应 | 第40页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第40页 |
| ·转化 | 第40-42页 |
| ·质粒DNA的提取(碱裂解法) | 第42页 |
| ·序列的拼接与生物信息学分析 | 第42-43页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-53页 |
| ·牦牛睾丸组织Boule基因选择性剪接体的筛选结果 | 第43-44页 |
| ·Boule基因剪接变异体序列分析 | 第44-47页 |
| ·Boule基因选择性剪接产物编码蛋白的结构特征分析 | 第47-50页 |
| ·Boule基因选择性剪接体蛋白的二级结构和三维结构预测 | 第50-52页 |
| ·牦牛、犏牛睾丸组织Boule1、Boule2剪接体mRNA荧光定量分析 | 第52-53页 |
| 3. 讨论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 第五章 牦牛BOULE基因5’端CPG岛DNA甲基化水平及其与犏牛雄性不育的关系研究 | 第57-71页 |
| 1 材料与方法 | 第58-63页 |
| ·实验动物 | 第58页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第58页 |
| ·牦牛睾丸组织基因组DNA的提取 | 第58-59页 |
| ·引物设计 | 第59页 |
| ·Boule基因5’端差异甲基化区域的扩增 | 第59-60页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第60页 |
| ·目的片段回收 | 第60页 |
| ·将目的片段连接到pMD19-T Vector上(TA克隆) | 第60-61页 |
| ·PCR产物与pMD19-T Vector连接反应 | 第60页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第60页 |
| ·转化 | 第60页 |
| ·质粒DNA的提取(碱裂解法) | 第60-61页 |
| ·序列的拼接与生物信息学分析 | 第61页 |
| ·基因组DNA的亚硫酸氢钠修饰 | 第61-62页 |
| ·BSP扩增反应 | 第62页 |
| ·序列的确认与统计分析 | 第62-63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-67页 |
| ·克隆与测序 | 第63页 |
| ·同源性分析 | 第63页 |
| ·序列特征分析 | 第63-64页 |
| ·牦牛Boule基因5'端DMR的BSP扩增 | 第64-67页 |
| 3. 讨论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 全文结论 | 第71-73页 |
| 全文创新 | 第73-75页 |
| 附录 | 第75-83页 |
| 1 RNA提取所需DEPC水的配制 | 第75页 |
| 2 聚丙烯酰胺电泳及银染配方 | 第75-76页 |
| ·PAGE电泳 | 第75-76页 |
| ·银染 | 第76页 |
| 3 琼脂糖电泳试剂配制 | 第76页 |
| 4 牦牛睾丸BOULE1蛋白的ELM分析 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
