| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一部分 文献综述 骆驼来源单域抗体在免疫治疗中的研究进展 | 第11-24页 |
| 1 骆驼重链抗体的生物学特征 | 第12-14页 |
| 2 骆驼VHH 单域抗体的克隆表达及其生化特性 | 第14-15页 |
| 3 VHH 单域抗体在免疫治疗中的研究进展 | 第15-18页 |
| ·抑制白细胞胞外酶活性 | 第16页 |
| ·中和细胞因子和可溶性蛋白 | 第16-17页 |
| ·靶向胞内抗原 | 第17-18页 |
| ·肿瘤靶向免疫诊断和治疗 | 第18页 |
| 4 VHH 单域抗体在其它方面的应用 | 第18-19页 |
| 5 问题与展望 | 第19页 |
| 参考文献 | 第19-24页 |
| 第二部分 实验研究 | 第24-56页 |
| 第一章 蒜氨酸酶免疫双峰驼单域抗体噬菌体文库构建 | 第24-45页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| ·菌种及质粒 | 第25页 |
| ·引物及试剂 | 第25-26页 |
| ·实验动物 | 第26页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-34页 |
| ·蒜氨酸酶抗原制备及骆驼免疫 | 第26页 |
| ·兔抗驼IgG 多克隆抗血清制备 | 第26-28页 |
| ·protein A 层析柱分离未免疫双峰驼IgG | 第26-27页 |
| ·兔抗驼IgG 多克隆抗血清制备 | 第27页 |
| ·ELISA 检测兔抗驼IgG 多克隆抗体水平 | 第27-28页 |
| ·免疫双峰驼血清中蒜氨酸酶抗体水平检测 | 第28页 |
| ·免疫双峰驼外周血淋巴细胞分离 | 第28页 |
| ·外周血淋巴细胞总RNA 提取及cDNA 合成 | 第28-29页 |
| ·外周血淋巴细胞(PBL)总RNA 提取 | 第28-29页 |
| ·cDNA 合成 | 第29页 |
| ·免疫双峰驼VHH 基因扩增 | 第29-31页 |
| ·VHH 基因扩增引物设计 | 第29-30页 |
| ·VHH 基因片段扩增及酶切消化 | 第30-31页 |
| ·VHH 抗体库构建及鉴定 | 第31-32页 |
| ·噬菌粒载体pCANTAB 5E 制备 | 第31页 |
| ·pCANTAB 5E 与VHH 基因连接 | 第31-32页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌TG1 | 第32页 |
| ·VHH 抗体库鉴定 | 第32页 |
| ·VHH 噬菌体抗体库表达 | 第32-34页 |
| ·辅助噬菌体M13KO7 扩繁 | 第32-33页 |
| ·辅助噬菌体M13KO7 滴度测定 | 第33页 |
| ·VHH 噬菌体抗体库表达及分离 | 第33页 |
| ·VHH 噬菌体抗体库滴度测定 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-40页 |
| ·蒜氨酸酶纯化 | 第34-35页 |
| ·兔抗驼IgG 多克隆抗体水平检测 | 第35-36页 |
| ·双峰驼抗蒜氨酸酶抗体水平检测 | 第36页 |
| ·双峰驼外周血淋巴细胞分离及总 RNA 提取 | 第36-37页 |
| ·双峰驼重链抗体VHH 基因扩增 | 第37-38页 |
| ·VHH 抗体库构建及鉴定 | 第38-40页 |
| ·VHH 噬菌体抗体库表达及滴度测定 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 参考文献 | 第42-45页 |
| 第二章 蒜氨酸酶抑制性抗体的初步筛选 | 第45-56页 |
| 1 材料 | 第46页 |
| ·VHH 抗体库 | 第46页 |
| ·菌种质粒 | 第46页 |
| ·引物及试剂 | 第46页 |
| 2 方法 | 第46-47页 |
| ·蒜氨酸酶特异VHH 抗体筛选 | 第46页 |
| ·pGEX4T-1-VHH A4 原核表达载体构建 | 第46-47页 |
| ·VHH A4 抗体的原核表达及纯化 | 第47页 |
| ·Western blot 分析VHH A4 的抗原特异性 | 第47页 |
| ·VHH A4 抗体的酶抑制活性检测 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-53页 |
| ·亲和淘洗筛选蒜氨酸酶特异VHH 抗体 | 第47-49页 |
| ·原核表达载体pGEX4T-1-VHH A4 构建 | 第49-50页 |
| ·VHH A4 抗体的融合表达与纯化 | 第50-51页 |
| ·免疫印迹分析VHH A4 单域抗体的抗原结合活性 | 第51-52页 |
| ·VHH A4 抗体的酶抑制活性检测 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 5 参考文献 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 个人简历 | 第58页 |
| 参与课题及发表文章 | 第58页 |
